该研究通过制备土霉素(oxytetracycline，OTC)的特异性抗体，建立了蜂产品中土霉素残留的酶联免疫吸附分析法(enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA)。具体包括以下四个方面的内容： 1.土霉素人工抗原的构建OTC分子量为460.2，是只有反应原性而无免疫原性的小分子物质，必须与蛋白质等载体结合转化为完全抗原后才能刺激动物产生抗体。由于OTC分子结构中含有氨基，所以可以以该基团为“桥梁”将OTC和载体蛋白连接起来。 该研究首先分别以碳化二亚胺(1-ethy1-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimidehydrochloride，EDC)和戊二醛(commercialglutaraldehyde，GA)作为偶联剂，将OTC与牛血清白蛋白(bovineserumalbumin，BSA)进行偶联，合成了复合物OTC-BSA，并分析了不同连接剂对蛋白偶联效果的影响。结果表明，以EDC或GA为偶联剂，均可得到OTC与BSA的偶联物，但是偶联物中OTC与BSA的摩尔比有很大的差异，以EDC为偶联剂时OTC：BSA摩尔比为4.00：1，而以GA作为偶联剂时仅为2.58：1，这说明EDC的偶联效果比GA的好。 进一步就OTC与BSA偶联时，BSA、OTC及偶联剂的混合方法对偶联物摩尔比的影响进行了研究，结果显示，向BSA溶液中边搅拌边缓慢地滴加OTC和EDC溶液时OTC-BSA偶联物中OTC与BSA的摩尔比较高，达7.97：1。该连接物注射BALB/c小鼠后能获得较好的抗体。 该研究还在上述研究的基础上制备了OTC与卵清白蛋白(ovalbumin，OV)的偶联物OTC-OV。 2.抗OTC抗体的制备以自制的OTC-BSA(摩尔比为7.97：1)连接物为免疫抗原注射BALB/c小白鼠，从抗体的产生进程来看，小鼠在第一次免疫后45天开始有明显的抗体产生，90天达到高峰，然后开始下降，间接非竞争ELISA测得其最高效价为1：20,000；进一步用间接竞争ELISA分析了此抗体的灵敏度与特异性，结果表明，所得抗体的灵敏度和特异性都较好，和其它结构相似或相近物质的交叉反应率较低。 3.几种蜂产品中OTC的ELISA检测对蜂蜜、蜂花粉、蜂王浆中OTC的提取方法进行了研究，得出了它们的最佳提取方法和条件。以自制的抗血清建立的间接竞争ELISA法对几种蜂产品中OTC的残留量进行了检测，所建立的间接竞争ELISA方法对土霉素的检测范围为5～200ng/ml，相关系数r=0.9951，在此范围内对人工污染样品的平均回收率为97.5％～107.0％。 4.试剂盒的试制在上述研究基础上进行了ELISA试剂盒的试制，ELISA试剂盒经适当处理后，4℃放置2个月和-20℃放置2.5个月，以间接非竞争ELISA测定的吸光值分别是起始时的1/10和1/3。
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