摘要
猪瘟(Hogcholera，HC或SwineFever，SF)，也称猪霍乱，为便于与非洲猪瘟区别，在欧洲又称为古典猪瘟(ClassicalSwineFever，CSF)。本病仍是危害我国养猪业的最重要的烈性传染病之一。多年来一直是我国猪病防治研究的首要对象。该病是由黄病毒科(TheFamilyF1aviviridae)瘟病毒属(TheGenusPestivirus)成员之一的猪瘟病毒(ClassicalSwineFeverVirus，CSFV；或HogCholeraVirus，HCV)引起猪的一种以高热稽留、小血管变性引起出血、梗塞和坏死、高死亡率等为主要特征的高度接触性传染病。在我国，虽然应用兔化弱毒疫苗较好地控制了猪瘟的大规模爆发流行，但自70年代末以来我国猪瘟的流行与发病特点发生了很大的变化，近年来我国猪瘟的发生又呈上升趋势，临床表现更为复杂，而且免疫猪群发生猪瘟越来越多。 单克隆抗体是20世纪70至80年代延生的生物高新技术，应用免疫学的抗体产生机理和细胞瘤杂交技术，获得单一抗原决定簇的高度均一相应抗体，该种抗体特异性，敏感性，一旦获得分泌特异单抗的杂交瘤细胞系，就可获得高度纯化，高度特异、有取之不尽，用之不完，可工厂化生产的针对单一抗原决定簇的抗体。由于单克隆抗体高特异、高纯度和高效价，在动物病原微生物的检测和动物疫病的诊断和治疗上，与多克隆血清相比较，具有绝对明显的优势。猪瘟病毒是养猪业危害最大的主要疫痛的病原微生物，每年给养猪业带来巨大的经济损失。要防制此疫病要对其进行流行病学调查，掌握疫病的发病的流行情况，那就要进行这些疫病的快速准确的诊断，才能进一步做好疫病防制工作。 本试验研制猪瘟病毒病原微生物的特异性单克隆抗体就是要为快速诊断和治疗猪瘟奠定基础。 特异性单克隆抗体的研制成功必将给猪这种主要疫病的诊断和特异性治疗带来很大的进步。 本试验采用纯化后的猪瘟兔化弱毒病毒液免疫六周龄健康Balb/C小鼠，第一次免疫用完全福氏佐剂疫苗，第二次用不完全福氏佐剂疫苗，第三次加强免疫三天后采血分离血清，检测免疫效果，免疫小鼠血清抗体OD490值上升至2.65，开始融合。融合用的骨髓瘤细胞是与制备脾细胞的小鼠为同一品系的SP2/O骨髓瘤细胞。融合的所用的骨髓瘤细胞必须处于生长旺盛的状态。饲养细胞在细胞融合前一天制备。 可供选择的细胞融合的方法有物理法如电融合、激光融合、化学法和生物融合法等。本实验采用化学法，融合剂为分子量为1000的聚乙二醇(PEG-1000)。 融合的过程是在50ml灭菌离心管中进行。按一定的比例将脾细胞和骨髓瘤细胞置于离心管内，使之充分接触，按严格的剂量逐滴加入融合剂使细胞发生融合。然后加入合适的培养基，滴加到铺满饲养细胞的培养板内培养。第二天检查是否污染。 当细胞长满培养板时，取细胞上清液，用间接ELISA进行阳性孔的筛选。对筛选为阳性的细胞，进行扩大培养。 阳性细胞长满培养板时，采用有限稀释法进行克隆。经过三次克隆后，将得到的阳性细胞注入小鼠腹腔，半个月后收取腹水，测定效价。 经过多次融合、筛选，得到四株阳性较强的杂交瘤细胞，命名为3D5，3D7，3F8和4B2。间接ELISA效价为1：102400到1：6400之间，基本达到实验的预期目标，为进一步的实验提供了关键的物质材料。 间接免疫荧光试验结果表明，这4株单抗均与CSFVE2蛋白和全病毒抗原反应；并且这4株单抗均与BVDVE2蛋白反应，说明它们针对的是CSFV和BVDV共同抗原表位。
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