摘要
病毒是导致马铃薯退化的主导原因。生产脱毒种苗是马铃薯病毒病防治的主要手段。茎尖培养是马铃薯脱除病毒的重要手段。其原理是利用病毒在植物体内分的不均匀性，即根、芽尖分生组织含病毒量少或不含病毒，将茎尖切下，经组织培养获得脱毒试管苗。脱毒试管苗经病毒检测确定已成功脱毒，经过切段快繁、温室或网棚内繁殖，获得脱毒扦插苗、微型小薯或原原种，再繁殖即可获得原种。 该文就影响马铃薯组培苗的激素浓度，影响扦插苗的基质和营养液及应用RT-PCR法进行脱毒苗检测进行了研究，得出如下结论： 1、不同浓度的NAA和KT对马铃薯组培苗的影响是不相同的，且二者有交互作用。 2、不同浓度的NAA和KT影响鲜重、根重、须根数和腋芽数的模型方程为： (z1z2z3z4)=(-15.3442-0.1004-0.12042.05130.1515-1.8812-0.1123-0.02390.38810.0305-537.77-4.3989-2.298380.5582.7072-121.553-4.6841-0.993314.7690.7435)(x2xyy2xy)+(0.1480.0323.82)其中(z1,z2,z3,z4)T=(鲜重，根重，须根数，腋芽)T。3、通过该方程计算出鲜重最大时二者的浓度配比为NAA：KT=0.0649：0.6020，根重最大时二者的浓度配比为NAA：KT=0.0904：0.4260，须根数最多时二者的浓度配比为NAA：KT=0.0728：0.5193，腋芽数最多时二者的浓度配比为NAA：KT=0.0561：0.2420(单位均为ml/L)。综合考虑，最佳的浓度配合为：NAA约为0.05ml/L-0.08ml/L，KT约为0.4ml/L-0.6ml/L。 4、就不同基质对克新1号扦插苗的成活率及生长指标影响研究得出结论，以蛭石、腐熟羊粪、林地腐殖土按照体积比为3：1：1扦插苗成活率最高，蛭石、林地腐殖土体积比为3：1配制基质时次之，蛭石、腐熟羊粪按照体积比为3：1配制基质时再次之，但3种基质均比对照(纯以蛭石为基质)好，成活率分别比对照增加8.78，13.67和11.89个百分点； 以蛭石、腐熟羊粪、林地腐殖土按照体积比为3：1：1配制基质时，对克新1号扦插苗生长最为有利，苗的增长量、腋芽数、须根数及根长等指标均最好，蛭石、林地腐殖土体积比为3：1次之，蛭石、腐熟羊粪体积比为3：1再次之，但各指标均比在纯蛭石上生长显著好； 而对添加了腐熟羊粪的基质和添加了林地腐殖土的基质的研究表明，前者更有利于根的伸长，而后者更利于苗的伸长，具体机制尚须进一步深入研究。 5、在不同的基质对安薯56扦插苗的成活率及生长指标影响研究得出结论，以蛭石、腐熟羊粪、林地腐殖土按照体积比为3：1：1和蛭石、林地腐殖土体积比为3：1配制基质时扦插苗成活率最高，且两者之间差异不显著，蛭石、腐熟羊粪按照体积比为3：1配制基质时次之，但3种基质均比对照(纯以蛭石为基质)好，与对照相比，成活率分别平均增加6.7778，11和10.6667个百分点。 以蛭石、腐熟羊粪、林地腐殖土按照体积比为3：1：1和蛭石、林地腐殖土体积比为3：1时对安薯56扦插苗生长最为有利，蛭石、腐熟羊粪体积比为3：1较好，且均比在纯蛭石上生长显著好。 6、综合分析知道，在蛭石中加入一定量的林地腐殖土和腐熟羊粪均可以提高扦插苗的成活率和生长质量，且以两者各加入20％(体积比，下同)时最佳，其次为加入25％林地腐殖土，再次为加入25％腐熟羊粪。 7、不同配比的营养液对扦插苗的成活率和质量的影响不显著，说明在实际应用中，没有必要配制含有微量元素的营养液进行浇灌，以NH4NO3和KH2PO4配成的营养液和自来水间隔一天轮流浇灌就可满足扦插苗的生长需要。 8、以提取的马铃薯总RNA为模板，分别用PVX、PVY、PLRV特异性引物进行RT-PCR反应，结果表明。脱毒后克新1号组培苗的PVX检出率为0％，PVY检出率为6.7％，PLRV检出率为6.7％，而安薯56的PVX检出率为13.33％，PVY检出率为6.7％，PLRV检出率为6.7％；在总共的90次检测中，经RT-PCR扩增有6份表现出清晰、明显的特异带，84份无特异带，总检出率占6.7％，未脱毒的样品PCR产物电泳后在紫外灯下观察，均可以观察到有明显的特异性DNA带，大小分别约为750bp、810bp、510bp，与预期扩增的750bp、812bp、512bp片断吻合，而成功脱毒后则无此特异性谱带，因此可以断定一些已经进行了脱毒但还是有特异性条带的样品为没有成功脱毒的样品。说明各自的引物对PVX、PVY、PLRV的PCR检测是特异的。
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