摘要
黄芪是一种常用的中药。含有多糖、蛋白质、生物碱、氨基酸、黄酮类、甙类、微量元素等多种生物活性物质，其中黄芪多糖(Astragaluspolysaccharides，APS)是黄芪主要生物活性成分。黄芪多糖具有增强机体的免疫功能，强心降压、降血糖、抗应激、抗肿瘤、抗病毒、抗辐射、抗氧化等多种药理功效。由于黄芪多糖的多种生物活性及良好的临床效果，多年来在国内外已成为中药提取及中草药现代化研究的焦点之一。 巨噬细胞在宿主防御反应中起了重要的作用，是天然免疫应答的主要参与者。激活的巨噬细胞能抑制多种肿瘤细胞和病原微生物的生长。另外，巨噬细胞还可作为抗原呈递细胞与T细胞相互作用来调节适当的免疫应答。巨噬细胞还参与胚胎期组织再塑、创伤修复、凋亡细胞的清除以及血细胞的生成。 研究表明黄芪多糖具有免疫调节作用。但对黄芪多糖的研究都是以总的多糖为研究对象，而尚未见对黄芪多糖进行分离，然后研究其对巨噬细胞细胞因子生成和释放的报道。为了探索黄芪多糖各级分对巨噬细胞细胞因子生成和释放的影响，本课题通过提取、分离、纯化得到不同分子量的黄芪多糖，然后将各级分黄芪多糖直接作用于巨噬细胞，运用酶联免疫吸附实验(ELISA)的方法，观察其对巨噬细胞细胞因子IL_1β、TNF-α和GM-CSF分泌的影响。同时将上述不同分子量级分黄芪多糖进行整体动物实验，通过酶联免疫吸附实验检测血清中细胞因子IL_1β、TNF-α和GM-CSF的含量，体内实验和体外实验相结合，进一步阐明黄芪多糖对巨噬细胞功能的影响以及增强机体免疫功能的机理。 黄芪多糖的制备结果显示：100g黄芪饮片通过水浴浸提，浓缩(浓缩液体积50ml，糖浓度为0.06g/ml，含糖量为60％)，醇沉后所得的粗多糖，经超滤分离为分子量小于3万、3万到5万之间、大于5万三个不同组分，质量分别为1.4g、1.6g、1.45g，硫酸—苯酚法测定糖含量，三部分分别含糖0.7g、1.12g、1.17g，其中分子量3万到5万之间和大于5万两个组分中糖的含量较高，含糖量分别为70％、81％。 ELISA实验结果显示：分子量3万到5万，大于5万和总的黄芪多糖均能显著促进巨噬细胞分泌IL-1β，而分子量3万到5万组还能显著促进巨噬细胞分泌TNF-α和GM-CSF。 本实验结果表明：用超滤的方法分离纯化黄芪多糖，所得的分子量3万到5万、大于5万两个组分含糖量较高，二者均能促进巨噬细胞分泌IL-1β，3万到5万级分还能促进巨噬细胞分泌TNF-α和GM-CSF。
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