摘要
目的 观察银杏叶提取物对糖尿病大鼠血糖、内生肌酐清除率的影响，以及其对糖尿病大鼠肾脏脂质过氧化、一氧化氮水平、一氧化氮合酶活性及基因表达的影响，结合肾脏的形态学改变，探讨银杏叶提取物对实验性糖尿病大鼠肾脏的保护机制。 方法 雄性Sprague-Dauley大鼠35只，随机取10只为正常对照组。余25只禁食12h后，一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)50mg/Kg，复制糖尿病模型，模型成功20只。成模后20只大鼠随机分成糖尿病(DM)组(n=10)和银杏叶提取物(GBE)治疗组(n=10)。GBE治疗组按8mg.kg-1.d-1剂量腹腔注射银杏叶提取物注射液，正常对照组、DM组同时腹腔注射同容积的生理盐水连续5周。处死前日，实验大鼠置于代谢笼收集24h尿液，计量后混匀留尿8ml测定24h尿蛋白定量及尿肌酐。股动脉放血处死大鼠，收集血标本，待测血糖、血肌酐(Scr)。同时迅速分离两侧肾脏，生理盐水反复冲洗后称重。取肾组织，以2.5％戊二醛、1％锇酸双固定，常规丙酮脱水、Epon812包埋，超薄切片、染色，电镜下观察肾脏超微结构。制备肾组织匀浆，RT-PCR法测定诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、神经型一氧化氮合酶(nNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因表达水平。同时，以黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性、硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量，硝酸还原酶法测定一氧化氮(NO)含量、化学比色法测定一氧化氮合酶(NOS)活性。 结果 1.血糖、血肌酐、内生肌酐清除率、体重、肾肥大指数、尿蛋白DM组血糖、肾肥大指数、内生肌酐清除率(Ccr)升高，体重下降，与正常对照组比较差异有显著意义(P＜0.01)，Scr、尿蛋白升高，变化无显著差异(P＞0.05)。GBE治疗组血糖、肾肥大指数下降，与DM组比较差异有显著意义(P＜0.05)；体重比DM组增加，但无显著差异(P＞0.05)；血糖、肾肥大指数、体重与正常对照组比较差异显著(P＜0.05)。 2.肾组织脂质过氧化和NO水平DM组肾组织SOD活性下降、NOS活性升高、MDA及NO含量升高，与正常对照组比较差异有显著意义(P＜0.05)。GBE治疗组，肾组织SOD活性升高、NOS活性下降、NO、MDA含量下降，与DM组比较差异均有显著意义(P＜0.05)，与正常对照组比较无显著差异(P＞0.05)。 3.肾组织NOSmRNA的表达DM组肾组织iNOSmRNA、eNOSmRNA的表达增强，nNOSmRNA的表达下降，与正常对照组比较差异有显著意义(P＜0.01)。GBE治疗组eNOSmRNA表达下降，nNOSmRNA表达增强，与DM组比较有显著差异(P＜0.01)，与正常对照组比较无显著差异(P＞0.05)；而iNOSmRNA表达比DM组明显下降(P＜0.01)，仍高于正常对照组(P＜0.05)。 4.肾脏超微结构的变化透射电镜下观察，正常对照组大鼠肾小球毛细血管为有孔毛细血管，内皮细胞见不规则窗孔，基底膜厚薄均匀，球囊脏层上皮细胞表面伸出许多细而长的足突，足突间保持一定间距，贴于基底膜外侧；DM组基底膜增厚，厚薄不均匀，部分区域呈局灶性增厚，足细胞突起肿胀、变短，并可见足突融合，球囊壁层细胞内线粒体扩张，肾小球内胶原纤维增多；肾小管表面微绒毛肿胀，肾小管上皮细胞内线粒体扩张，嵴减少。GBE治疗组，基底膜基本正常，足细胞足突肿胀消退，内皮细胞内线粒体正常；肾小管上皮细胞内线粒体肿胀明显减轻。 结论 1.GBE可提高DM大鼠肾脏SOD的活性，减少肾脏脂质过氧化物MDA形成，从而减轻DM大鼠肾脏自由基代谢紊乱。 2.GBE可抑制DM大鼠肾组织iNOSmRNA、eNOSmRNA的表达，降低NOS的活性，减少NO的生成，从而可能减轻DM大鼠肾小球高滤过状态的形成和血管功能紊乱。 3.GBE可减轻DM大鼠肾脏肥大，改善肾脏病理改变，从而延缓糖尿病肾病的进展和恶化，其机制可能与减轻肾脏氧化应激水平、减少NO的生成有关。
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