摘要
树突状细胞介导的T细胞抗多发性骨髓瘤活性的体外研究背景：多发性骨髓瘤是B细胞来源的恶性肿瘤，传统治疗有一定效果，但微小残留病灶的存在，使骨髓瘤易复发，以树突状细胞(DC)为基础的免疫治疗有助于清除骨髓瘤微小残留病，成为近年来骨髓瘤治疗的热点之一。 目的：1、比较AIM-V无血清培养基和含20％FBS的RPMI-1640培养基培养健康人外周血来源的DC的数量、形态和免疫表型，探讨负载U266细胞裂解物的DC瘤苗活化的T细胞对U266细胞的体外杀伤作用；2、研究负载骨髓瘤细胞裂解物、独特型蛋白的树突状细胞瘤苗活化的T细胞对自体和异体骨髓瘤细胞的杀伤作用。 方法：1、采集健康人抗凝外周血分离单个核细胞，贴壁细胞分别用含重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、重组人白细胞介素-4(IL-4)的AIM-V无血清培养基和RPMI-1640+20％FBS培养基体外诱导培养6天，收集DC，显微镜观察细胞形态、计数，流式细胞仪检测免疫表型；DC培养至第6天，加入U266细胞裂解液和TNF-α，48h后收获致敏DC；非贴壁细胞(淋巴细胞)作为效应细胞与致敏DC共育5天，MTT法检测致敏DC刺激自体T细胞的增殖能力及T细胞对U266细胞的杀伤作用；2、采集骨髓瘤患者外周血来源的单个核细胞，用含GM-CSF和IL-4的AIM-V无血清培养基诱导培养贴壁细胞，第6天分别加入自体Ig和瘤细胞裂解液，48h后收获致敏DC；非贴壁细胞(淋巴细胞)作为效应细胞与致敏DC共育5天，MTT法检测致敏DC刺激自体T细胞的增殖能力以及自体T细胞对自体瘤细胞和异体瘤细胞的杀伤作用。 结果：1、健康人外周血来源的单个核细胞用AIM-V无血清培养基或RPMI-1640+20％FBS培养基诱导培养的DC在数量、形态和免疫表型上无明显差异(P＞0.05)。效应细胞与U266细胞按数量比为5∶1、10∶1、20∶1混合培养时，负载U266细胞裂解液的DC+IL-2刺激后的T细胞比单独应用IL-2刺激后的T细胞对U266细胞的杀伤作用更明显(P＞0.05)，且T细胞对U266细胞的杀伤率随效靶比的增加而升高，效靶比为20∶1时，杀伤率最高为32.9±5.1；2、骨髓瘤患者外周血来源的单个核细胞用AIM-V无血清培养基诱导培养的DC负载自体骨髓瘤细胞裂解液或Ig都能活化自体T细胞杀伤骨髓瘤细胞，强于单独应用IL-2(P＜0.05)；负载Ig的DC活化的自体T细胞能够杀伤自体和异体骨髓瘤细胞，但对异体骨髓瘤细胞的杀伤作用较小。 结论：用GM-CSF、IL-4诱导培养健康人外周血单个核细胞可以得到不成熟的DC，体外负载U266细胞全抗原，TNF-α刺激成熟后得到致敏DC，可以刺激自体T细胞增殖并能杀伤U266细胞；利用骨髓瘤患者外周血可以诱导培养出DC，负载自体骨髓瘤细胞裂解物或Ig后的DC瘤苗对自体和异体瘤细胞均有抗瘤作用。
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