摘要
采用猪睾丸细胞(ST细胞)静置培养和胰酶处理样本的方法，从猪传染性胃肠炎疑似病例粪便中分离到一株TGEV。该分离株电镜观察呈圆形或椭圆形，大小均一，直径为100-120nm。病毒带有囊膜，厚度约为10nm，表面附有纤突，长度约为18nm左右。对该病毒分离株进行RT-PCR扩增，序列分析证明分离的病毒为猪传染性胃肠炎病毒。该分离株对氯仿敏感，不耐热，常温下pH3.0对毒力影响不大。 对其培养条件进行优化结果表明：用含10％犊牛血清RPMI1640营养液、pH7.4条件下培养ST细胞，能显著提高细胞生长速度和形成单层的质量并且有利于接毒后对CPE的判定；病毒在ST和PK-15细胞上均能产生CPE，但病毒在ST细胞上CPE出现早，且病变明显，毒价为106.33TCID50/0.1ml，高于PK-15细胞毒毒价；病毒的最佳收毒时间为48h。维持液中添加血清(2％)或一定量胰酶对TGEV增殖效果影响不大。在37℃下用甲醛灭活，至规定的时间，用焦亚硫酸钠终止其灭活，用细胞感染法检测灭活效果，结果表明TGEV细胞培养液完全灭活的时间为48h。 以该分离株为种毒接种猪睾丸细胞(ST)，制备病毒抗原液，毒价不低于105TCID50/0.1ml。经甲醛溶液灭活后与油相佐剂乳化研制成油乳剂灭活疫苗3批。对该制品的安全性、免疫性进行了测定。18g左右小白鼠接种0.3ml，初生仔猪和妊娠母猪加倍剂量注射，均未出现不良反应，安全性良好。用该疫苗免疫3日龄初生仔猪，分别于免疫后7、14、21、28、35d抽取仔猪血样用微量血清中和试验检测血清抗体。结果在免疫后14d中和抗体滴度达到最高值，21d时中和抗体滴度与14d时水平相当，然后随日龄增大而下降。被动免疫试验中，免疫母猪所产仔猪通过哺乳获得了相当高的血清抗体，在出生后第14d时接近母源抗体水平。免疫仔猪用分离毒株进行攻击，保护率为100％，对照组全部发病。证明本试验研究的疫苗具有良好的免疫效果。
NETL