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不同化疗方案对裸鼠MCF-7乳腺癌移植瘤及VEGF、Bcl-2和PCNA表达的影响
王玉栋1
作者信息
摘要
目的：化疗作为恶性肿瘤三大常规治疗方法之一，已成为恶性肿瘤治疗不可替代的手段。尽管临床上规范化治疗的实施，但仍无法保证患者个体化化疗的有效性，还存在过度化疗、盲目化疗等不合理的现象。如何真正达到个体化化疗在临床肿瘤治疗中显得尤为重要。肿瘤药敏试验对指导临床个体化化疗具有重要的意义。以往肿瘤药敏试验对单个药物的检测较多，而对联合方案的研究较少，如何进一步提高肿瘤药敏试验临床相关性，增加化疗疗效、减少耐药性和毒副作用变得越来越重要。而对化疗疗效的评定除大体WHO通用评价方法之外，还有常规显微镜下观察化疗后病理形态学改变的组织学评定。对肿瘤组织病理形态学观察的同时结合肿瘤标志物检测的对照研究综合评价化疗效果是一种新尝试，我们曾针对新辅助化疗对乳腺癌特异性基因(breastcancerspecificgene，BCSGl)的影响进行了研究，发现BCSGl表达从蛋白质水平和mRNA水平上均受到化疗的影响而下降，可作为评价乳腺癌患者化疗效果的指标。在此基础上，本研究拟探究临床常规检测的乳腺癌预后指标对不同化疗方案的反应，进而探讨其是否能在预测预后的同时指导化疗方案的选择。 VEGF、Bcl-2和PCNA在判断预后方面的作用已较为肯定，而它们在评价化疗效果方面的作用少有人系统研究。有鉴于此，本研究将通过动物实验首先从大体上观察不同化疗方案对MCF-7乳腺癌移植瘤裸鼠饮食、活动、体重和肿瘤重量变化的影响，综合分析不同化疗方案对乳腺癌移植瘤裸鼠模型的抑瘤作用和影响因素；在此基础上，采用HE染色、免疫组织化学方法和流式细胞检测技术结合移植瘤组织病理形态学，探讨VEGF、Bcl-2和PCNA蛋白对乳腺癌不同化疗方案效果评价的指导意义和应用价值。最终探讨新辅助化疗(术前化疗)与乳腺癌预后指标间的关系，为指导临床化疗方案的选择，推行个体化治疗寻找新的依据和思路。 方法：1建立模型和实验分组：将88只接种乳腺癌MCF-7瘤株并成瘤的裸鼠随机分为10个化疗组和1个对照组，每组8只裸鼠。其中5个化疗组按1/3LD10剂量，另5个化疗组按2/3LD10剂量分别给予化疗方案(CMF、CAF、NP、TP、Xeloda)干预；对照组给予生理盐水，模拟临床顺序腹腔内或口服给药。2观察指标及抑瘤作用评价：每日定时观察记录荷瘤裸鼠的饮食、活动和体重情况，并测量记录移植瘤的生长情况，计算抑瘤率，分析在不同剂量强度下各化疗方案对MCF-7乳腺癌移植瘤裸鼠模型的抑瘤作用和影响因素，选择最适宜的剂量强度组进行后期研究。采用HE染色，常规光学显微镜下观察移植瘤组织化疗后病理形态学变化，并进行病理组织学化疗疗效分级评价。3免疫组化法和流式细胞术检测：采用免疫组化SP法和流式细胞术检测乳腺癌移植瘤组织VEGF、Bcl-2和PCNA蛋白的表达情况，对比分析化疗组与对照组之间差异。4相关分析：分析乳腺癌移植瘤组织VEGF、Bcl-2和PCNA蛋白表达与病理组织化疗疗效分级的关系。5统计分析：采用spss统计软件(10.0版)，实验数据均以均数土标准差((x)±s)表示。各项参数值之间用x2检验、spearman等级相关分析。 结果：1荷瘤裸鼠体重，瘤重和抑瘤率：2/3LD10剂量各化疗组裸鼠体重明显低于对照组，均有显著性差异(P＜0.05)；各化疗组瘤重明显低于对照组，均有显著性差异(P＜0.05)；抑瘤率分别为83.1％、75.5％、84.6％、87.9％、91.0％。1/3LD10剂量各化疗组裸鼠体重均低于对照组体重，均有显著性差异(P＜0.05)；各化疗组瘤重低于对照组，但仅有CMF组与对照组有显著性差异(P＜0.05)，抑瘤率分别为36.7％、18.0％、20.5％、19.5％、18.0％。结果显示2/3LD10剂量化疗组可较准确反应化疗药物的联合作用和对裸鼠的影响，临床相关性较好，故选择2/3LD10剂量化疗组进入下面的研究。2免疫组化检测结果：各化疗组VEGF阳性标记指数(1abelingindex，LI)均显著低于对照组，均有显著性差异(P＜0.05)，且TP和Xeloda组显著低于CMF和CAF组(P＜0.05)；NP组显著低于CAF组(P＜0.05)。各化疗组Bcl-2蛋白LI值均高于对照组，CAF、NP、TP和Xeloda与对照组有显著性差异(P＜0.05)。两两比较，TP组较CMF、CAF组显著增高(P＜0.05)。各化疗组PCNA蛋白LI值明显低于对照组，均有显著性差异(P＜0.05)，且NP组显著低于CMF、CAF、TP和Xeloda组(P＜0.05)，TP、Xeloda组显著低于CMF、CAF组(P＜0.05)。3流式细胞术检测结果：各化疗组VEGF表达荧光指数(Fluorescenceindex，FI)值与对照组比较均显著下降，有显著性差异(P＜0.05)，且NP、TP和Xeloda组显著低于CAF和CMF组(P＜0.05)，Xeloda组显著低于NP组(P＜0.05)。各化疗组Bcl-2表达FI值与对照组比较显著升高，均有显著性差异(P＜0.05)，且TP和Xeloda组显著高于CMF、CAF和NP方案(P＜0.05)。各化疗组PCNA表达FI值较对照组显著下降(P＜0.05)，且TP和Xeloda组显著低于CMF、CAF组(P＜0.05)，NP组显著低于CMF组(P＜0.05)。4VEGF、Bcl-2和PCNA表达与病理学化疗疗效分级的关系：VEGF蛋白表达在三个疗效分级间有显著性差异(x2=33.216，P＜0.05)；呈显著正相关(r=0.650，P＜0.05)。Bcl-2蛋白表达在三个疗效分级间有显著性差异(x2=12.542，P＜0.05)；呈负相关趋势，但无统计学意义(r=-0.306，P＞0.05)。PCNA蛋白表达在三个疗效分级间有显著性差异(x2=12.061，P＜0.05)；呈显著正相关(r=0.540，P＜0.05)。 结论：1针对乳腺癌MCF-7荷瘤裸鼠的体内药敏试验，选用2/3LD10剂量进行联合化疗方案药敏试验可较准确地反映化疗药物的联合作用和对机体的影响，临床相关性较好。 2不同化疗方案均可降低裸鼠MCF-7乳腺癌移植瘤组织VEGF和PCNA蛋白表达，并增强Bcl-2蛋白表达。其中TP和Xeloda两个方案对三者表达的影响显著，而NP仅对VEGF和PCNA蛋白表达的影响显著。3化疗后MCF-7乳腺癌移植瘤组织VEGF和PCNA蛋白表达与病理学化疗疗效分级呈显著正相关，而Bcl-2蛋白表达与病理学化疗疗效分级呈负相关趋势。4对比半定量的免疫组化法和定量的流式细胞术检测VEGF、Bcl-2和PCNA表达，前者更简便，重复性好，且反映全面。5VEGF、Bcl-2和PCNA表达水平均可作为判断乳腺癌化疗效果的评价指标，且可为临床制定治疗方案提供参考，尝试做为指导个体化治疗的依据。
关键词
乳腺癌移植瘤/药敏试验/MCF-7/联合化疗/VEGF/Bcl-2/PCNA/免疫组化/流式细胞术引用本文复制引用
授予学位
硕士学科专业
肿瘤学导师
刘巍学位年度
2006学位授予单位
河北医科大学语种
中文中图分类号
R73