摘要
荷叶是睡莲属植物莲(NelumbonuciferaGaertn)的叶片，在全世界有着广泛的分布，是一种既是食品又是药品的天然植物。荷叶含有多种药理活性成分。多年的临床经验表明，荷叶复方具有很强的降脂、减肥功能，其中黄酮和生物碱为主要活性物质，但它们在调节血脂、减肥方面的功效一直不明确，限制了广阔的荷叶资源开发利用的深度。本文旨在通过对荷叶黄酮的提取、精制、分离纯化，继而对其进行深度研究，并将荷叶黄酮、生物碱单体进行调节血脂功能实验比较，以揭示它们的生物活性，为有效利用荷叶资源打下基础。为此本论文开展了以下工作： 1.荷叶黄酮最佳提取工艺的确定 设计了单因素和正交试验，研究超声波辅助提取荷叶黄酮的最佳工艺条件。实验中以荷叶黄酮的提取率为指标，通过单因素实验确定了荷叶黄酮提取工艺参数的适宜范围，并进一步通过正交实验L9(34)设计进行筛选，研究了各因素对荷叶黄酮提取率影响的主次顺序，确定了最佳提取参数。结果表明，超声波提取辅助比直接用乙醇-水提取更加节时、节能，提取率高；影响荷叶黄酮提取率的各因素的主次顺序为固液比、温度、时间；超声波辅助提取荷叶黄酮的最佳提取参数为：乙醇浓度60％、时间40min、温度70℃、固液比1：40、提取2次，在此工艺条件下荷叶黄酮的提取率达到100.92±0.37mg/g。 2.大孔树脂对荷叶黄酮的分离纯化 使用大孔树脂吸附法对荷叶黄酮进行了纯化。通过静态吸附-解吸实验，从HZ-801、HZ-802、HZ-803、HZ-806四种树脂中筛选了HZ-806大孔吸附树脂对荷叶黄酮进行纯化，通过对吸附液浓度、吸附液流速、洗脱剂流速、洗脱剂浓度和用量等因素的考察，确定出最佳吸附工艺。结果表明HZ-806树脂对荷叶黄酮类化合物具有良好的选择吸附性，最佳吸附工艺为：上柱流速为2mLmin-1、上柱液浓度为1.91mgmL-1、解吸剂用量：树脂量为4：1，水洗量为3倍的柱体积，洗脱流速为1mLmin-1，在此工艺条件下产品纯度由28.97％提高到了89.04％。 3.荷叶黄酮类化合物的组成分析 对分离纯化后得到的黄酮制品，采用高效液相色谱(HPLC)分析其中组成，并采用半制备高效液相色谱对未知组分进一步分离纯化，通过紫外光谱(UV)、高效液相(HPLC)、核磁共振(NMR)(包括1H-NMR、13C-NMR)等手段分析，确定未知组分的结构，结果显示出荷叶中含有芦丁和槲皮素，其中芦丁为首次从荷叶中分离获得。 4.荷叶黄酮含量变化规律的研究 对扬州宝应采集的不同生育期阶段的荷叶进行总黄酮含量、芦丁和槲皮素含量的研究表明：5月份种藕萌发，荷叶营养主要由种藕供应，含量较高，达到111.94±0.18mg/g：至6月中旬，莲藕完全转入自养生长阶段，老藕逐渐腐烂，此阶段莲藕生长含量变化旺盛，叶片高低错落，转入营养与生殖生长并进阶段：至7月份后，莲藕完全进入新藕生长阶段，荷叶含量较低：至8月中旬左右，生藕发育成形，大小变化不变，能量进入储蓄阶段，荷叶含量较高，达到105.37+0.52mg/g；9月份后，叶片逐渐衰老，凋谢。荷叶中芦丁含量在11.80～19.15mg/g之间，槲皮素含量很少。 5.荷叶黄酮调节血脂作用研究 对分离纯化的荷叶黄酮进行了大鼠动物实验。实验结果表明：在选剂量范围内，荷叶黄酮、生物碱对调节血脂中甘油三酯(TG)的指标都有显著作用，但对应于相同剂量生药的荷叶黄酮不如荷叶生物碱作用显著。
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