摘要
增生性瘢痕是机体创伤后组织过度愈合反应的结果，是病理性瘢痕的一种，可造成机体的局部畸形和不同程度的功能障碍。其防治方法虽多，但效果均不满意。激光技术治疗瘢痕的副反应较轻，常用的有Nd：YAG，Dye，CO2，Er：YAG激光及色素Q-转换激光等，但都属于临床实验应用，对于激光治疗瘢痕的原理并没有深入探讨。 应用脉冲染料激光治疗瘢痕始于20世纪90年代初期，原理在于其能特异性作用于微血管。595nmVbeam激光血管治疗仪也是一种脉冲染料激光，波长595nm，脉宽具有可调性，可根据不同病变适当选择，并配有动态冷却系统，可适当调整冷却系统的发射及间隔时间，在治疗血管性疾病中起到良好效果。有研究认为染料激光最适于治疗增生性瘢痕和瘢痕疙瘩，应用脉冲染料激光治疗瘢痕可抑制小血管的形成并闭合小的血管，目前多见于临床实验治疗，但其对成纤维细胞及胶原合成的作用还鲜有报道。 目的：研究595nmVbeam脉冲染料激光照射对增生性瘢痕动物模型伤口愈合中的作用及机理。 方法：成年大耳白兔20只，建立兔耳腹侧面增生性瘢痕模型，上皮化后切取一组瘢痕8处，然后将瘢痕随机分为激光治疗组和对照组，激光治疗组在创面上皮化后按一定参数进行激光照射，开始时每周照射1次，1个月后改为每两周照射1次，共两个月。对照组不进行治疗。在上皮化后1，2，4，6，8周分别切除两组增生性瘢痕各8处，每次取材前用游标卡尺测量瘢痕厚度，对切取组织进行苏木精-伊红和Masson染色、免疫组化法测定增殖细胞核抗原蛋白表达、TUNEL法原位检测细胞凋亡、原位杂交法进行Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的测定，并对上皮化后4周组织进行电镜观察，对比研究在瘢痕形成过程中595nmVbeam脉冲染料激光照射对兔耳增生性瘢痕的影响。 结果：兔耳增生性瘢痕经595nmVbeam脉冲染料激光照射后，按不同时间段取材与对照组比较，①瘢痕厚度明显变薄：创面上皮化后即出现增生块高出于皮面，且不断增厚，在上皮化后4周时最高，以后逐渐下降。激光照射(即上皮化后)2，4，6周后激光治疗组瘢痕增生厚度显著小于对照组。②苏木精-伊红染色显示不同时间取材的兔耳增生性瘢痕组织对照组真皮层明显增厚，为周围正常真皮厚度的3-4倍。而激光治疗组真皮层较对照组变薄。Masson染色显示瘢痕胶原纤维呈蓝色，对照组可见蓝染较深的胶原纤维，外形粗大，排列杂乱无章。而经激光照射的瘢痕虽然也可见蓝染的胶原纤维，但与对照组比较蓝染变浅且纤细，胶原排列也趋于一致。③高倍镜下成纤维细胞计数在上皮化后随时间逐渐增多，在上皮化后4周时达到高峰，以后又下降，但在上皮化后1，2，4，6，8周激光治疗组成纤维细胞数量与对照组比较未见明显减少(P＞0.05)。④透射电镜观察显示经595nmVbeam脉冲染料激光照射4周后成纤维细胞核变小、畸变，胞质中细胞器减少，细胞功能不活跃，线粒体空泡变性，细胞周围的胶原呈溶解状态。⑤增殖细胞核抗原蛋白表达：上皮化后增殖细胞核抗原阳性细胞反应率随时间推移逐渐增高，至上皮化后4周达到高峰。增殖细胞核抗原阳性细胞反应率上皮化后为18.33％，上皮化后4周，激光治疗组为41.93％，对照组为64.26％，从上皮化1周后开始激光治疗组较对照组明显减弱(P＜0.01)。⑥细胞凋亡的原位检测：瘢痕形成早期仅有少量凋亡细胞，上皮化后4周时激光治疗组凋亡细胞明显增多，到上皮化后6周达到高峰，与对照组比较有极显著差异(P＜0.01)。⑦Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的检测：创面上皮化后即出现Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的高表达，并持续到上皮化后6周，以后阳性表达减弱。激光治疗组与对照组比较，Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达从上皮化2周开始减少，差异具有显著性(P＜0.05)，上皮化后4周开始有极显著的差异(P＜0.01)。 结论：595nmVbeam脉冲染料激光照射可抑制成纤维细胞增殖，抑制胶原合成，诱导细胞凋亡，并进而抑制兔耳增生性瘢痕的形成过程。应用595nmVbeam脉冲染料激光预防和治疗瘢痕可行。
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