摘要
本研究的目的是探讨重组人内皮抑素(recombinanthumanendostatin,rhES)表达、纯化及复性的最佳生产方案。 方法：活化rhES工程菌，诱导表达，提取并洗涤包涵体，然后变性、复性、浓缩。在多步骤中取样，做聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和革兰氏染色，摸索最佳实验条件。最后通过鸡胚尿囊膜实验(chorioallantoicmembrane,CAM)检测rhES活性。 结果：1.rhES诱导表达结果表明，A600nm=O.6～0.7时，加入IPTG诱导，表达效果最理想；IPTG的浓度对表达影响不大；诱导4小时表达量较高。2.破菌结果显示：反复冻融法明显比一次冻融效果好；超声破菌法效果更佳，本文认为待超声菌液为4毫升时，超声5秒、间歇5秒、600W的条件下超声5分钟足以完全破菌。3.由rhES洗涤结果可见，选择0.5M尿素洗涤液效果最佳。4.rhES产品纯度超过95％，每升培养基可得rhES蛋白6mg。5.CAM中rhES显著抑制新血管生长并促进血管消退。 结论：提取到高浓度、高活性的可溶性rhES是集合多个优化条件的结果，本文摸索的实验方法提供了一套切实可行的方案，为大规模生产rhES奠定了基础。
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