摘要
本研究旨在建立一种高敏感度的非侵入性检测方法，以便在高危人群中筛查食管癌前病变，以期降低食管癌的发病率和死亡率。 研究方法：挑选16个SEREX技术筛选、鉴定并经统计学分析优化的食管癌前相关抗原，采用pET-30b(+)原核表达载体将它们在E.coli中进行表达，采用His-Tag亲和层析和SDS-PAGE制备胶电泳纯化表达产物，经复性后用SDS-PAGE和WesternBlot鉴定蛋白纯度。结果显示，16个抗原经表达、纯化后获得了纯度大于90％的纯化蛋白。采用接触式芯片点样仪将纯化的16个抗原蛋白点样于醛基化的玻璃片基上制备蛋白芯片。采用这种食管癌抗原蛋白芯片对241例食管癌和234例正常人血清、50例食管癌前轻度不典型增生、50例中度不典型增生、50例重度不典型增生、35例原位癌及50例高发区正常人血清，以及323例食管癌前血清和550例食管癌高发区现场普查人群血清中的IgG和IgM型自身抗体进行了检测。同时通过免疫组化、ELESA法对这一方法进行了分析。 研究结果：结果显示该芯片检测的重复性好，大部分样本(82％的孔内、78％的片间、72％的批间)的误差均小于15％。这种抗原蛋白芯片检测食管癌的敏感性和特异性分别为89％和78％；检测癌前轻度不典型增生、中度不典型增生、重度不典型增生、原位癌的敏感性和特异性分别为92％和78％、94％和94％、93.8％和80％、95％和90％；检测癌前病变总人群的敏感性和特异性分别为91.3％和76％。采用在癌前血清检测中确定的阳性判断标准对高发区323例食管癌前血清和550例普查血清检测结果显示，该蛋白芯片检测技术在两种血清的检测中对于中度和重度不典型增生以及原位癌检测结果与内镜加病理诊断的结果符合率均为100％，对于轻度不典型增生的符合率也达到95％以上；与细胞学结果比较，在细胞学诊断为重Ⅱ、重Ⅲ和癌的样本中符合率为100％。 研究结论： 1.食管癌前病变相关抗原蛋白芯片检测技术对于筛查食管癌前病变具有很高的敏感性和特异性，具有替代细胞学手段和食管内窥镜手段用于高危人群筛查癌前病变的能力，为高发区高危人群筛查提供了一种易于接受、简便、快捷、成本低廉的新的筛查手段。 2.免疫组织化学及血清自身抗体含量分析结果提示，肿瘤相关抗原免疫原性产生机制可能是多样的，除抗原表达的上调外，抗原蛋白的转位及下调表达均可能是其免疫原性产生的机制之一。 3.ELISA法检测结果表明在食管癌前筛查中检测血清中自身抗体可能比直接检测这些相关抗原本身的表达异常更简便、更灵敏。
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