含有MAR序列的STI-STII-LTB融合基因在苜蓿中的表达

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中文摘要：本实验首先利用PCR方法从普通烟草基因组中克隆到一段MAR序列(matrixattachmentregion)，将其正向重复构建在植物表达载体pBI121β-葡糖醛酸酶(β-glucuronidase,GUS)基因表达框的两侧，形成一个广泛应用的新的植物表达载体。再通过PCR方法分别从pGEM-5Zf(+)-STI、K88ab(LT+，ST+)质粒中扩增到了耐热肠毒素STI、STII基因，通过三引物PCR实现了STI、STII基因的融合，再与不耐热肠毒素LTB基因5’端融合，并在ST基因和LTB基因之间插入7个氨基酸的连接肽，置于同一阅读框。将融合基因STI-STII-LTB构建到带有核基质结合区序列(MARs)的植物表达载体pBI121-MARs中GUS基因的位置。同样的方法构建了不带有MAR序列的重组质粒。构建的重组质粒分别进行PCR检测、酶切分析及核苷酸序列分析，结果表明，插入的融合基因核苷酸序列与预期的一致，且阅读框正确。重组质粒pBI121-MARs-STI-STII-LTB、pBI121-STI-STII-LTB通过冻融法转化根癌农杆菌EHA105，PCR法鉴定含有所转质粒的农杆菌菌株。用农杆菌侵染6-7日龄的杂花苜蓿下胚轴，经愈伤组织诱导培养、不定芽诱导培养、生根诱导培养，完成转基因苜蓿植株的再生，得到抗性转基因苜蓿植株。转基因苜蓿植株经PCR检测、Southern-blot分析表明，转基因苜蓿植株基因组中可检测到MAR序列基因、STI-STII-LTB融合基因；提取转基因苜蓿植株总蛋白质，SDS-PAGE结果显示，转基因植株表达了重组抗原蛋白，且带有MAR序列的转基因苜蓿蛋白表达量要高于不带MAR序列的转基因苜蓿蛋白表达量；Western-dot免疫检测验证了转基因植株表达的重组抗原有免疫原性。本实验为以后生产抗腹泻的转基因植物疫苗提供了科学依据。

作者：

武冬梅

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关键词：

MAR序列 STI基因 STII基因 LTB 融合基因杂花苜蓿基因表达转基因植物

授予学位：

硕士

学科专业：

生物化学与分子生物学

导师：

陈创夫、祝建波

学位年度：

2006

学位授予单位：

石河子大学

语种：

中文

中图分类号：