摘要
食药用真菌作为药物，在我国已有几千年的历史，其中所含有的生物活性物质，尤其是多糖类物质，作为增强人体免疫功能的生物反应调节剂更是为人们所熟知。如今，食药用真菌已成为现代医学寻找具有抗肿瘤和免疫增强功能新药的一个重要源泉。鉴于此，我们对雷蘑(Clitocybegigantean)AS5.105的深层发酵技术与抗肿瘤效应进行了研究，以期了解雷蘑胞外多糖类物质的生理活性。 雷蘑(Clitocybegigantean)AS5.105是我国一种著名的野生真菌，其味鲜美，营养价值高。本文报告了对抗肿瘤活性较强的雷蘑深层发酵条件优化及对小鼠免疫功能的影响所进行的系统研究，主要研究结果如下： 1.通过苯酚-硫酸法显色实验验证了雷蘑(Clitocybegigantean)AS5.105在深层发酵时合成了胞外多糖，在出发培养基发酵过程中产生了54.0mg·100mL-1胞外多糖。通过对比确定了苯酚-硫酸法检测雷蘑胞外多糖含量的最佳条件：浓硫酸的体积和总体积之比为5∶7；快速滴加浓硫酸放热，可使反应在室温进行；放置30分钟后吸光度稳定。 2.采用单因子实验和正交设计法，对影响雷蘑菌丝生长以及发酵产糖的诸多因素进行了研究和探讨，所选取的相关因素为碳源、氮源、无机盐、维生素B1、起始pH、发酵温度、时间、装液量和转速。结果表明，对雷蘑(Clitocybegigantean)AS5.105发酵产糖量具有显著影响的因子为葡萄糖、酵母膏、MgSO4、KH2PO4、维生素B1起始pH、发酵温度、时间、装液量。 3.采用正交设计法，确定了雷蘑发酵培养基的最佳组成(/L)：为葡萄糖35.0g、酵母膏3.0g、MgSO41.0g、KH2PO41.5g、维生素B150mg、蒸馏水1000mL、起始pH6.5，并进行了显著性检验。 4.对影响雷蘑菌丝生长及发酵胞外多糖的3个关键外界影响因素发酵温度、时间和装液量的最佳水平范围进行了研究与探讨。在发酵工艺参数分别为初始pH6.5，10％的接种量，100mL·500mL-1的装液量，28℃的培养温度，160rpm的转速和发酵时间7d的工艺条件下，每100mL发酵醪可获得93.6mg以上的胞外多糖。 5.采用高、中、低浓度的雷蘑胞外多糖为受试物，以小白鼠免疫器官重量法为研究方法，测定多糖对荷瘤小鼠抗肿瘤和免疫的效果。结果表明：雷蘑胞外多糖对肉瘤S180具有抑制作用，其最佳剂量为500mg·kg-1·d-1，抑瘤率为51.13％。高浓度组与对照组相比较，荷瘤小鼠的胸腺指数和脾脏指数均有显著增加，分别从2.85升至4.29和6.84升至10.31,量效之间存在线性关系，P＜0.05；与低浓度组相比较，脾脏指数有显著增加，p＜0.05；能明显对抗环磷酰胺所致的小鼠免疫器官萎缩，增强小鼠的免疫功能。对小鼠的始、终重量、脏器指数和相对生长率皆无明显的影响。上述表明雷蘑多糖能明显提高小白鼠的免疫能力。
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