摘要
本文对草鱼MHCⅠ和β2m基因组与二级结构及其单链复合体鉴定病毒表位进行了研究。文章采用PCR技术从草鱼基因组DNA中克隆了部分Ctid-MHCⅠ基因组序列和2个Ctid-β2m基因组序列。用pMAL-p2X/E.coli表达系可溶性表达了Ctid-MHCⅠ和Ctid-β2m融合蛋白。采用圆二色谱(CD)测定了MBP-MHCⅠ、MBP-β2m、MBP蛋白的二级结构(2D)组成；并同源模建了Ctid-MHCⅠ和Ctid-β2m蛋白的三级结构(3D)。随后，采用SOE-PCR技术将MHCⅠ-linker-β2m串联成基因链，再用pMAL-p2X/E.coli表达系进行可溶性表达。CD测定了融合MBP-MHCⅠ-linker-β2m蛋白的二级结构组成。在此研究的基础上，合成了草鱼呼肠孤病毒(GCRV)外衣壳蛋白T细胞表位多肽(GCRV-VP4和GCRV-VP7)，与MHCⅠ-linker-β2m蛋白体外结合，用酸洗法从MHCⅠ-linker-β2m-peptide复合物中洗出GCRV-VP4和GCRV-VP7，经过脱盐等处理后，用质谱仪测定其分子量和氨基酸序列图谱。然后，免疫BALB/C小鼠，流式细胞术检测外周血中CD8+T细胞含量的变化，并用ELISA法检测血清中IFN-γ水平，以检测筛选出的抗原多肽的免疫活性。
NETL