摘要
目的：在果蝇表达系统中表达并获得高纯度的B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitisBvirusXprotein，HBx)。 方法：PCR扩增获得B、C基因型乙型肝炎病毒X基因(分别为Xb及Xc)，以AgeI及BgllI位点将其克隆入果蝇表达载体pMT／BiP／V5／HisC，构建相应的重组表达载体。重组载体与筛选质粒pCoBlast以脂质体Cellfectine共转染果蝇S2细胞，25gg／mlBlasticidin筛选获得多克隆抗性细胞株。扩增细胞并以CuS04诱导HBx蛋白表达，Western—Blot鉴定表达产物并确定最佳的蛋白表达时间和诱导浓度。大规模培养细胞并诱导表达，用两种方法纯化获得高纯度的B、C基因型HBx。 结果：1、成功构建了B、C基因型乙型肝炎病毒X基因的重组质粒pMT／BiP-Xb'HisC和pMT／BiP-Xc-HisC；2、获得稳定表达HBx融合蛋白的S2细胞株，确定了融合蛋白在S2细胞中表达的最佳时间是诱导后72h，适宜的CuS04诱导浓度为500μM～lmM；3、获得纯度为84．59％和94．62％的HBx融合蛋白。 结论：B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白在果蝇表达系统中成功表达，经大规模表达纯化获得高纯度的融合蛋白，为进一步探讨B、C基因型HBx结构和功能差异奠定了基础。
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