摘要
芍药苷(paeoniflorin，Pae)为白芍总苷(totalglucosides0fpaeony，TGP)中的主要成分。本课题组以往的研究发现，TGP具有抗炎、抗氧化、免疫调节和抗肝损伤等作用。本研究采用卡介苗(BacillusCalmette．Guerin，BCG)和脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)共同诱导的急性免疫性肝损伤(immunologicalliverinjury，ILI)模型，首先从整体上考察Pae拮抗肝损伤作用，然后采用逆转录聚合酶链反应(reversetranscriptionpolymersechainreaction，RT-PCR)分析Pae调节ILl小鼠肝组织肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor，TNF)．a、白细胞介素(interleukin，IL)．6、脂多糖结合蛋白(1ipopolysaccharidebindingprotein，LBP)、分化群(cluster0fdifferentiation，CD)14和TLR4mRNA水平的量效和时效关系，最后采用Western-blot和免疫组化(immunohistochemistry，IHC)分析Pae对ILl小鼠肝组织细胞胞浆蛋白IKB-a和核蛋白NFKBp65表达水平的影响，进而对Pae调节TLR4信号转导通路的部分机制作了初步探讨。 目的：研究TLR4介导BCG／LPS诱导ILI的机制；芍药苷对小鼠ILI的作用及其调节TLR4信号转导的部分机制。 方法：小鼠尾静脉注射BCG，12天后再次尾静脉注射LPS诱导ILI模型；灌胃(intragastricadministration，ig)给予Pae(25，50，100mg．kg-1)12天(day，d)，联苯双酯(bifendate，BiD为阳性对照药。 采用分光光度法测定血清丙氨酸氨基转移酶(alanineaminotransferase，ALT)活性；称重法检测肝脾指数；放免法检测血清TNF-a水平；采用苏木素．伊红(hematoxylin-eosin，HE)染色，在光学显微镜下观察肝组织中炎性细胞的积聚，肝细胞的变性、坏死等病理变化，并根据病理分级标准统计分析；采用RT-PCR检测肝组织TNF-a、IL-6、LBP、CDl4和TLR4mRNA的转录水平；IHC检测肝组织CDl4、NFKBp65的表达水平；Westernblot方法检测肝组织IκB-a和．NFKBp65的表达水平。 结论： LTNF-a、IL-6、TLR4、LBP和CDl4参与了ILI的病理生理过程，并在其中发挥重要作用。 2．Pae能降低ILl小鼠血清和肝脏指标水平，改善肝功能，减轻肝组织病理损伤，提示Pae对ILI具有明显的保护作用。其作用可能与下述机制有关： (1)降低血清TNF-a的水平以及肝组织TNF-amRNA的转录水平； (2)上调IL-6mRNA转录，可能与抑制TNF-a的产生密切相关； (3)下调TLR4、LBP和CDl4mRNA转录，从而减弱TLR4介导的信号转导； (4)上调IKB-a表达，从而降低游离的NFKBp65水平。 以上研究结果将为Pae开发成治疗免疫性肝损伤的中药新药提供了实验依据。
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