摘要
目的：在天然、营养、回归大自然的热潮中，人们越来越趋向于使用天然抗氧化剂，从植物资源中寻找安全、高效的天然抗氧化剂成为近年来研究的热点。葡萄籽原花青素(GSPE)是一种具有广泛生物活性，且安全高效的天然抗氧化剂，在功能食品、医药卫生等领域受到极大的关注。研究发现，GSPE在清除自由基、抗氧化，抗动脉粥样硬化，降血脂，抗炎，调节免疫等方面具有广泛的生物学效应。迄今，有关GSPE对糖尿病及其慢性并发症的防治方面的研究甚少，作用机制也尚未明确。本文在以往研究的基础上，通过制备四氧嘧啶大鼠糖尿病模型，从肾功能、抗氧化系统、NO系统等方面进行分析，旨在探讨GSPE对糖尿病，尤其是糖尿病肾损伤的防治作用及其可能机理。 方法：健康雄性SD大鼠，体重160M80g，适应性饲养5天，按体重随机分为正常对照组(10只)、模型组(40只)，模型组大鼠禁食12h，按200mg／kg．bw(分两次隔日注射)腹腔注射新鲜配制的4％四氧嘧啶生理盐水溶液，72h后剪尾采血测定空腹血糖，以血糖值(≥)16．7mmol／L并伴有多饮、多食、多尿症状者作为糖尿病(DM)大鼠，不合标准的大鼠弃用。将筛选出的30只DM大鼠按血糖值随机分为DM对照组、GSPE高剂量组(150mg／kg'bw)、GSPE低剂量组(50mg／kg'bw)，每组10只。各组动物自由饮水摄食，GSPE各剂量组大鼠每日灌胃给予GSPE水溶液，正常对照组及DM对照组给予等体积的蒸馏水，共观察6周。实验期间每2周采血测空腹血糖1次，每周称重1次。至实验期末，将动物置于洁净代谢笼，收集24h尿，记录体重后，乙醚吸入麻醉，心脏采血，离心分离血清测定尿素氮(BUN)、肌酐(Cre)等肾功能指标及血清总抗氧化能力(T-AOC)、一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)；并剖取双肾，准确称重，制备lO％肾组织匀浆及提取’肾脏线粒体，测定组织丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、NO含量和NOS活性，肾脏线粒体活性氧(ROS)生成及Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性。 结果：(1)GSPE对糖尿病大鼠血糖的影响实验期间，DM对照组大鼠血糖维持在较高水平，远高于正常组大鼠血糖，GSPE组大鼠血糖水平与DM组比较差异无显著性(p>0．05)。(2)GSPE对糖尿病大鼠体重、肾重指数及肾功能的影响DM对照组和GSPE剂量组大鼠的体重均明显低于正常组(p<0．01)。DM对照组大鼠的。肾重指数、肌酐清除率(CCr)、24h尿蛋白、血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、均较正常组大鼠有明显升高(p<0．01)。GSPE高剂量组大鼠的肾重指数、CCr、24h尿蛋白、SCr低于DM对照组，GSPE低剂量组大鼠的CCr、24h尿蛋白、BUN亦低于DM对照组，差异均有显著性。(3)GSPE对糖尿病大鼠抗氧化酶活性、脂质过氧化反应及肾脏线粒体活性氧生成的影响与正常对照组比较，DM对照组大鼠血清总抗氧化能力(T-AOC)、肾组织SOD、GSH-Px活性明显降低，肾组织MDA含量明显升高，-肾脏线粒体的活性氧(ROS)生成亦明显高于正常组大鼠，差异均有显著性。而GSPE高剂量组大鼠’肾组织SOD、GSH-Px活性较DM对照组明显升高，MDA含量明显降低，。肾脏线粒体内ROS生成亦低于DM对照组，差异均有显著性。(4)GSPE对糖尿病大鼠肾脏线粒体ATP酶的影响与正常对照组比较，DM对照组大鼠肾脏线粒体Na+-K+-ATP酶、Ca2+一ATP酶活性明显降低(p<O．01)。而GSPE高剂量组的Na+-K+-ATP酶，Ca2*-ATP酶活性高于DM对照组(p<O．05)。(5)GSPE对糖尿病大鼠NO、NOS的影响DM对照组大鼠肾脏、血清NO含量及NOS活性与正常对照组相比明显升高。GSPE低剂量组大鼠的肾脏NO含量、血清及肾脏NOS活性低于DM对照组，GSPE高剂量组大鼠的血清NOS活性亦低于DM对照组，差异均有显著性。 结论：(1)GSPE对糖尿病大鼠的血糖无明显影响。(2)GSPE可改善糖尿病大鼠的肾功能，降低肾脏MDA含量，减少肾脏线粒体ROS生成量，提高肾脏SOD、GSH-Px的活性，提示GSPE对糖尿病肾病具有一定的防治作用。(3)GSPE可提高肾脏线粒体Na+一K+-ATP酶和Ca++-ATP酶活性，对维持肾脏线粒体的钙平衡具有一定的作用。(4)GSPE对NOS活性具有一定程度的抑制作用，可降低血清及肾脏的NO含量。综上所述，GSPE对四氧嘧啶糖尿病大鼠肾脏具有保护作用，对肾功能有一定的改善作用。其机理可能是通过其抗氧化作用提高机体抗氧化防御能力，减少ROS的生成，抑制肾脏脂质过氧化反应，促进过氧化物的清除，降低机体的氧化应激水平，和／或通过抑制NOS活性，改善。肾血流动力异常，从而减少或减轻糖尿病肾脏并发症的发生发展。
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