摘要
目的： 本研究通过对处于不同成熟时期卵子慢冻速融，应用偏振光显微镜(polarizedlightmicroscopy，Polscope)非侵入性的观察纺锤体的变化，以及复苏后卵子发育潜能研究，旨在为建立一种安全、有效的卵子冷冻保存与复苏方法提供理论依据和实验技术。 方法： 不同成熟时期人卵母细胞采集自体外受精一胚胎移植(invitrofertilization-embryotransfer，IVF-ET)和卵胞浆内单精子显微注射(intracytoplasmicsperminjection，ICSI)治疗周期的不育患者周期治疗中剩余的未成熟卵子(GV期和MI期)。 实验分组：对照组(n=56)，直接将未成熟卵子进行体外成熟培养(invitromaturation，IVM)，进行纺锤体观察，并行ICSI；MII卵冻融组(n=73)，先将GV期和MI期卵子体外成熟培养到MII期进行冻融，将存活的卵子进行纺锤体观察，并行ICSI；MI／GV冻融组(n=91)，将GV期和MI期卵子冷冻，冻融后复苏的卵子进行体外成熟培养，成熟的卵子进行纺锤体观察，并行ICSI。 用慢冻速融的方法对成熟卵子和未成熟卵子进行冷冻和解冻，观察冻融对卵子体外成熟能力的影响；不同成熟时期卵子的复苏情况；应用Polscope对卵子的纺锤体进行观察，了解冻融对卵子纺锤体的影响；不同成熟时期卵子的受精及发育潜能。 结果： 1、对照组卵的体外成熟率为78．6％，MII卵冻融组卵的体外成熟率为79．4％，MI／GV卵冻融组的卵体外成熟率为60．9％，对照组与MI／GV卵冻融组有明显的统计学差异(P<0．05)，冷冻后未成熟卵的体外成熟率下降；MI期卵与GV期卵的体外成熟率(74．8％；71．4％)无统计学差异(P>0．05)，MI期卵与GV期卵在体外具有相似的成熟能力。 2、MII卵冻融后的复苏率为67．6％，MI／GV卵总复苏率为71．9％，MI期卵复苏率为72．7％，GV期卵为70．6％。MII期卵、MI期卵和GV期卵复苏率相似，无统计学差异(P>0．05)。 3、对照组纺锤体可见率77．3％，明显高于MII卵冻融组、MI／GV卵冻融组(56.3％；53．8％，P<0．05)，冷冻造成了纺锤体的损伤。MII卵冻融后的纺锤体可见率(56.3％)与冻融MI期和GV期卵子成熟后的纺锤体可见率(52．0％；57．1％)无统计学差异(P>0．05)，冻融MI期和GV期卵子并没有减少对纺锤体的影响。 4、对照组的受精率(81．8％)明显高于MII卵冻融组、MI／GV卵冻融组(62．5％；59．0％，P<0．05)，冷冻后的卵子受精能力受到损害；对照组的卵裂率与MII卵冻融组无明显统计学差异(83．3％；733％，P>0．05)，M11卵冷冻组的卵裂没有受到明显影响；对照组的卵裂率与MI／GV卵冻融组有明显统计学差异(83．3％；56．5％，P<0．05)，MI／GV卵冻融后卵裂率明显下降。 5、对照组的异常受精率为9．1％，M11卵冻融组与MI／GV卵冻融组的异常受精率有所增高(16．7％；15．4％)，但与对照组相比无统计学差异(P>0．05)。 6、对照组优质胚胎率为19．4％，两个冷冻组没有优质胚胎。结论： 1、超排卵周期中获得的未成熟卵无论是先冷冻再体外成熟，还是先体外成熟后再冷冻，都具有受精和发育成早期胚胎的能力。 2、冻融对卵的体外成熟能力造成了影响。 3、减数分裂纺锤体可见率在两个冻融组卵都显著降低，冻融对成熟卵和未成熟卵的细胞骨架都造成了一定的损伤，冷冻后纺锤体的存在情况在一定程度上反映了冷冻保存方法的可行性。 4、纺锤体可见率高的对照组卵子的发育潜能高于纺锤体可见率低的两个冻融组，冻融对卵子的发育潜能造成了一定的影响，纺锤体的存在一定程度上也反应了卵子的质量和发育潜能。 5、MI／GV卵冻融组体外成熟率下降，卵裂率与对照组相比显著下降，MII卵冻融组卵裂率与对照组相比无显著差异，总体上Mil卵冻融优于MI／GV卵冻融。
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