摘要
目的 缝隙连接细胞通讯与白内障发生的关系是白内障研究领域的一个新的热点，兴起于近几年，研究处起始阶段。晶状体是一个无直接血供的透明组织，需通过特殊的机制进行物质代谢以维持透明性。晶体上皮细胞在保持晶体透明性方面起着重要的作用[1]。晶体上皮细胞之间以及晶体上皮细胞与晶体纤维细胞之间是通过缝隙连接进行营养物质的运输，代谢产物的排泄和晶体各种成分之间渗透性平衡调节的[2]。流行病学证据表明，长期慢性的紫外线辐射被认为是老年性白内障形成的主要原因，而近紫外线辐射对晶状体上皮细胞GJIC的影响及由此导致的白内障的发生机理，在国内外尚未见相关研究报道。本实验的目的旨在探讨近紫外线照射对兔眼晶体上皮细胞缝隙连接通讯功能的影响情况及其发生机理，其深入的研究将为紫外线辐射引起的老年性白内障的发病机制提出一个新的理论依据，为以后白内障的药物防治开创了一条全新的思路。 方法 1．取兔晶状体前囊膜行组织细胞培养，传代的2-3代RLECs在12孔板中培养24小时，同一近紫外线光源下一固定位置(50cm)，测得该点的功率为0．2mW／cm2，按照不同的照射时间分别为5、10、15、20、25、30分钟，对RLECs进行照射。采用相差显微镜观察照射后细胞形态学的改变，台盼蓝拒染法计算细胞的损伤率。 2．采用荧光光漂白恢复技术，通过激光共聚焦显微镜检测经近紫外线照射后RLECs的缝隙连接通讯功能变化情况。 3．应用Western-blot方法，从翻译水平检测近紫外线对RLECs的Cx43蛋白表达变化的影响；采用间接免疫荧光染色法，对RLECs的Cx43蛋白进行定位分析。 结果 1．倒置相差显微镜观察发现：经近紫外线照射5分钟、10分钟的RLECs其形态与正常对照组相比无明显改变，随着照射时间的延长，细胞形态出现一系列改变：胞浆可见点状颗粒和空泡、细胞核密度增高等，当照射30分钟时细胞则出现胞质浓缩，颜色加深，核固缩等改变。 2．台盼蓝拒染法观察发现：同一照射强度，随着照射时间的延长，损伤率逐渐增加，5分组、10分钟组、15分钟组与对照组比较，损伤率无统计学差异(P>0．05)；20分钟组、25分钟组、30分钟组与对照组相比，损伤有显著性差异(P<0．01)。 3．荧光光漂白恢复技术(FRAP)测定正常对照组和近紫外线照射组细胞GJIC功能，正常对照组细胞平均荧光恢复率为58．337~5．620％，随着照射时间的延长，实验组细胞平均荧光恢复率逐渐下降，分别为34．205~3．652％、18．809+3．017％、7．029+2．917％，与正常对照组相比有显著性差异(P<O．01)，表明经近紫外线照射的RLECs缝隙连接通讯功能明显降低。 4．Western-blot结果显示：Cx43蛋白在近紫外线照射组及正常对照组的晶状体上皮细胞中均有表达，正常对照组为高表达，随着近紫外线照射时间的增加，其Cx43蛋白的表达逐渐降低。Cx43荧光标记定位结果显示：经近紫外线照射后正常定位于晶状体上皮细胞膜上的Cx43发生了内移，并出现数量上的变化。 结论 1．组织形态学研究：证实近紫外线照射能引起兔晶状体上皮细胞形态学的改变，并且同一照射强度，随着照射时间的延长，损伤率逐渐加重。 2．细胞分子水平的研究：证实近紫外线照射能降低兔晶状体上皮细胞缝隙连接通讯功能，并且随着照射时间的增加，其功能下降越明显；其发生的机制可能与兔晶状体上皮细胞缝隙连接通讯的关键蛋白connexin43表达的下降和功能定位的改变有关。
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