石斛的离体培养及遗传稳定性的分子检测

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中文摘要：石斛属(DendrobiumSW.)是兰科(Orchidaceae)多年生草本植物。在《本草纲目》中石斛被列为上品，具有明目强身、镇痛消炎、抗肿瘤、抗衰老、增强机体免疫力等功效。本研究以金钗石斛为材料，在离体培养、遗传稳定性两领域开展了工作，以期为资源的离体保存、快繁等提供理论指导和构建技术平台，现取得以下结果： 1茎段离体培养技术的建立与优化选用金钗石斛的嫩茎为外植体，用70％酒精浸泡30s后，分别用以下两种方式灭菌，1)0.1％升汞灭菌12min，2)0.1％升汞+数滴Tween80灭菌10min；两种灭菌方式的灭菌效果差别很大，污染率分别为73.3％、16.7％。随后接种在MS+BA(1.0mg/L)+NAA(0.4mg/L)+蔗糖(3.0％)+琼脂粉(0.7％)培养基上，萌发后转接到MS+BA(1.2mg/L)+NAA(0.4mg/L)+蔗糖(3.0％)+琼脂粉(0.7％)培养基上，通过器官型方式，诱导侧芽的萌发增殖；壮苗培养以1/2MS+NAA(0.5mg/L)+IBA(0.5mg/L)+蔗糖(2.0％)+琼脂粉(0.7％)培养基上效果最佳；生根培养以1/2MS+NAA(1.0mg/L)+蔗糖(2.0％)+琼脂粉(0.7％)培养基上效果最佳；移栽时将一次性塑料杯底部及四周打上孔，先放入两个松果后再铺上苔藓或者树皮均能获得90％以上的移栽成活率。 2金钗石斛愈伤组织培养体系愈伤组织诱导：采用无菌试管苗的茎段诱导愈伤组织，不同的基本培养基、生长激素、细胞分裂素及激素浓度对愈伤组织的诱导上有一定差异，诱导率为改良MS2＞MS＞1/2MS＞＞改良MS1；NAA＞IBA；BA＞KT；在MS+NAA(0.8mg/L)+BA(0.5mg/L)+蔗糖(3.0％)+琼脂粉(0.7％)培养基上诱导率稍高。愈伤组织增殖：经综合评定，MS＞1/2MS＞改良MS2＞＞改良MS1；NAA、IBA＞IAA；蔗糖＞葡萄糖；在MS+NAA(0.8mg/L)+BA(0.5mg/L)+蔗糖(3.0％)+琼脂粉(0.7％)培养基上增殖效果最好，约90d左右增殖倍数可达23.98倍。愈伤组织培养的最佳时间是90-100d。愈伤组织再分化：GA对愈伤组织的再分化效果极强，远远强于BA、KT，当GA浓度为0.5-1.0mg/L时有利于诱导愈伤组织再分化，出苗整齐，生长状况好。丛生芽壮苗增殖培养：经愈伤组织再分化形成的丛生芽在MS+IBA(0.4mg/L)+蔗糖(2.0％)+琼脂粉(0.7％)培养基上增殖效果及苗的生长状况最好。 3愈伤组织遗传稳定性的RAPD检测采用42个随机引物对金钗石斛不同继代次数的愈伤组织DNA进行RAPD检测，结果表明，愈伤组织在继代15代以内，没有检测到遗传变异，但在16代时，DNA分子标记变异率为0.11％。

作者：

宋常美

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关键词：

金钗石斛离体培养茎段愈伤组织遗传稳定性分子标记

授予学位：

硕士

学科专业：

植物学

导师：

文晓鹏

学位年度：

2006

学位授予单位：

贵州大学

语种：

中文

中图分类号：

Q94