摘要
研究超极化激活环核苷酸门控(hyperpolarization-activatedcyclicnucleotide-gated，HCN)阳离子通道对穿通纤维通路(perforantpathway，PP)——海马CA3区突触传递的影响及氨基酸释放的调节作用，并探讨二者之间的内在联系。 方法 应用细胞外电生理记录技术记录电刺激PP诱发的CA3区群锋电位(populationspike,PS)；高效液相色谱(highperformanceliquidchromatography，HPLC)荧光检测技术测定海马组织及培养海马神经元细胞外液中谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸及γ-氨基丁酸(γ-aminobutyricacid，GABA)含量；透射电子显微镜技术观察大鼠海马组织CA3区突触超微结构的改变；建立新生大鼠海马神经元原代培养技术，应用荧光钙成像系统观察单个海马神经元细胞内钙的变化。 结果 第一部分:HCN通道对PP-海马CA3区突触通路正常低频突触传递及海马组织氨基酸释放的影响 HCN通道阻滞剂ZD7288及CsCl对低频刺激PP(0.5Hz)后90min内海马CA3区PS幅值的的影响及海马组织氨基酸含量的变化。生理盐水对照组(Control组，施与低频刺激，微注射生理盐水1μL)，ZD7288(20，100,200nmol)组(施与低频刺激，注药容积为1μL)及CsCl(1，5，10μmol)组(施与低频刺激，注药容积为1μL)；各组大鼠于电生理记录完毕迅速处死、取材、冻存备测氨基酸含量。 第二部分:HCN通道对PP-CA3区突触通路长时程增强(LTP)的影响 观察ZD7288及CsCl于强直刺激(tetanusstimulation，TS；刺激电压45V,波宽0.15ms，频率500Hz，4串，每串含50脉冲，串间隔2s)前及后给药对PP-CA3通路LTPPS幅值、起始潜伏期、峰潜伏期的变化，海马CA3区突触超微结构的变化及海马组织氨基酸含量变化。实验动物随机分为：对照组即control组(仅给予测试刺激不施加强直刺激)、LTP诱导组即TS处理组(给予强直刺激诱导LTP后持续观察90min)、ZD7288-TS组(强直刺激前5min于海马CA3区局部注入ZD7288100nmol)、CsClTS组(强直刺激前5min于海马CA3区局部注入CsCl5μmol)、TSZD7288组(强直刺激后30min局部注入ZD7288100nmol)及TSCsCl组(强直刺激后30min局部注入CsCl5μmol)。 第三部分:HCN通道对培养海马神经元氨基酸释放及谷氨酸引起的钙内流的影响 在细胞水平，研究HCN通道对体外培养海马神经元氨基酸释放以及谷氨酸所致钙内流的影响。 结论 1.HCN通道参与PP-海马CA3区通路正常低频突触传递过程，其机制可能与其对氨基酸类神经递质释放的调节有关。 2.HCN通道参与PP-海马CA3区突触通路LTP的诱导和形成，其机制可能为： ①促进突触前谷氨酸的释放而抑制GABA及甘氨酸的释放 ②促进谷氨酸引起的突触后细胞内钙的增加 ③调节突触前、后超微结构的改变。
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