摘要
目的和意义 铜绿假单胞菌是引起医院感染的重要病原体，多重耐药的铜绿假单胞菌感染可导致临床治疗困难，病死率增加。而亚胺培南是治疗多重耐药铜绿假单胞菌的有效药物，随着它的广泛使用，对其耐药的铜绿假单胞菌日益增多。本文分析亚胺培南耐药铜绿假单胞菌对常用抗菌药物的耐药性，研究对亚胺培南的耐药机制及所产金属β-内酰胺酶的类型，阐明同济医院铜绿假单胞菌对常用抗菌药物的耐药性及同源性，为指导临床合理使用抗菌药物特别是碳青霉烯类，新药研究及开发，加强感染控制措施，及时切断多重耐药株的克隆传播和水平传播，密切监测耐药株的变迁及其发展提供科学依据。 方法 收集同济医院2004年1月～9月亚胺培南耐药铜绿假单胞菌存活株29株，琼脂稀释法测定29株铜绿假单胞菌存活株对常用的10种抗菌药物的最低抑菌浓度(minimalinhibitoryconcentrations，MIC)。通过双纸片协同试验(double-disksynergytesting，DDST)、聚合酶链反应(polymerasechainreaction，PCR)、序列分析(sequencing)等方法检测金属β-内酰胺酶并分析其类型。紫外分光光度法测定金属β-内酰胺酶的活性。脉冲场凝胶电泳(pulsedfieldgelelectrophoresis，PFGE)分析耐药菌株的同源性。 结果 经过WHONET5.3软件分析，同济医院1998年至2004年铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性呈逐年上升趋势，由1998年7.3％上升至2004年14.3％。同济医院2004年1～9月共分离铜绿假单胞菌193株，对头孢噻肟、庆大霉素和四环素的耐药率分别为38.5％、42％和93.7％，其余抗菌药物的耐药率均低于20％。对亚胺培南和美罗培南或头孢他啶交叉耐药的铜绿假单胞菌分别为15株(11.0％)和14株(7.3％)。 193株铜绿假单胞菌中，亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌(IMP-R-Pae)共39株。IMP-R-Pae和亚胺培南敏感的铜绿假单胞菌(IMP-S-Pae)对四环素的耐药率均在90％以上；对哌拉西林/他唑巴坦的耐药率分别为28.6％和17.9％，差异无显著性；对于其他抗菌药物的耐药率，IMP-R-Pae组明显高于IMP-S-Pae组，且差异呈极显著性。 药物敏感性试验结果显示，存活的29株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌均为多重耐药株。头孢噻肟和头孢他啶的耐药率分别为69％和27.6％。氨曲南和阿米卡星的耐药率均为44.8％，其MIC50和MIC90均为16μg/ml和256μg/ml。亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为93.1％和69％，MIC50和MIC90均为32μg/ml和256μg/ml。29株铜绿假单胞菌中有34.5％(10/29)的菌株对亚胺培南的MIC＞32μg/ml，属于高水平耐药[11][12]。庆大霉素和阿米卡星的耐药率分别为82.8％和44.8％，MIC50分别是256μg/ml和16μg/ml，MIC90均为256μg/ml。环丙沙星、哌拉西林/他唑巴坦和四环素的耐药率分别为41.4％、48.3％和100％。 双纸片协同试验检测29株铜绿假单胞菌中有11株金属β-内酰胺酶阳性，阳性率为37.9％。金属β-内酰胺酶基因检测显示有2株细菌产VIM-2型金属β-内酰胺酶(6.9％)。紫外分光光度法检测两株产酶株的酶活性分别为27.35±3.25U,26.58±3.18U。 采用脉冲场凝胶电泳技术对29株铜绿假单胞菌进行分子分型，PFGE图谱共分为16个基因型，A、B、C、D、E、F、G型各有两株以上，其中D型3株，分别来自器官移植病房(2株)和神经内科病房(1株)的不同患者，标本采集时间相近，且均使用过呼吸机辅助呼吸，其余类型各1株，两株产金属β-内酰胺酶菌株不属于同一基因型，。 结论 同济医院2004年1～9月分离的铜绿假单胞菌，除对头孢噻肟、庆大霉素和四环素耐药率较高，分别为38.5％、42％和93.7％，对其他抗菌药物的耐药率均低于20％。亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌对于抗菌药物的耐药率均高于亚胺培南敏感组，除四环素和哌拉西林/他唑巴坦外，差异均呈极显著性(P＜0.01)，且亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌通常表现为多重耐药。 29株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌，对头孢噻肟、庆大霉素、美罗培南和四环素的耐药率大于60％；对环丙沙星、氨曲南、阿米卡星和哌拉西林/他唑巴坦耐药率相近，为41％～48％；对头孢他啶耐药率最低，为27.6％。 双纸片协同试验产金属β-内酰胺酶菌株阳性率为37.9％。基因检测只发现2株产VIM-2型金属β-内酰胺酶。 PFGE分型结果提示同济医院亚胺培南耐药铜绿假单胞菌可能存在小范围的流行，即可能有耐药菌株的克隆传播。同济医院亚胺培南耐药铜绿假单胞菌之间尚未发现灭活酶基因的水平传播。
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