摘要
大豆异黄酮为近年来国内外中药研究的热点之一。本实验收集了25个不同品种的大豆样品，进行了异黄酮类化合物的提取，采用紫外分光光度法、高效液相色谱法以及液相色谱-质谱分析手段，从含量测定、指纹图谱不同角度研究了大豆作为植物药材的内在品质，为科学评价大豆异黄酮质量提供了有意义的探索。 本实验首先采用正交试验方案对大豆异黄酮提取过程中的可能影响因素(乙醇浓度、料液比、提取时间以及提取次数)进行试验，确定了最佳提取工艺，然后建立了一阶导数光谱法测定大豆异黄酮含量的方法，为大豆异黄酮的质量评价提供了定量依据。 本实验采用反相高效液相色谱法，在室温条件下以C18柱(4.6mm×250mm，5μm)为固定相，甲醇-水(冰醋酸调pH为3.2)为流动相进行梯度洗脱，流速0.6mL/min，261nm处进行检测，建立了大豆乙醇提取物异黄酮的色谱指纹图谱。实现了包括染料木黄酮在内的23个色谱峰的分离，获取了该植物药材中与异黄酮有关的信息，并将所得的色谱数据进行化学模式识别研究，用系统聚类分析将采集到的大豆样品分成了3类，表明不同大豆品种之间与异黄酮有关的化学成分之间存在差异。在对色谱数据进行系统聚类分析的基础上，采用中国药典委员会推荐使用的“中药色谱指纹图谱相似度评价软件”计算了各样本与对照指纹图谱的相似度。同时本文还采用对照品、紫外光谱图以及HPLC-MS定性方法对指纹图谱中主要色谱峰进行了归属研究，确定了主要色谱峰的可能化学结构归属。 针对同一中药样本在不同实验室条件下所得的色谱指纹图谱中色谱保留时间易产生漂移的现象，本实验对大豆异黄酮指纹图谱在不同色谱仪及不同色谱柱上保留时间的漂移进行了校准研究。首先选取5个极性适当的化合物作为标准样品，在不同仪器及不同色谱柱上用已建立的大豆异黄酮HPLC指纹图谱条件进行测定，对其保留时间进行线性回归，利用得到的常数a、b对不同仪器及不同色谱柱上测得的大豆异黄酮指纹谱中峰面积大于总峰面积1.5％的色谱峰的保留时间进行校正，使不同仪器及不同色谱柱上得到的保留时间的最大绝对误差由5.868min减小为0.854min。通过校正使各色谱峰保留时间的重现性大大提高。实验结果表明，这种利用色谱热力学理论建立的提高不同色谱仪器及不同色谱柱之间色谱保留时间重现性的方法为中药指纹图谱在不同实验室之间的推广提供了有益的参考。
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