摘要
寻找普通小麦功能基因的差异，开发功能基因的分子标记，直接标记目标基因本身，对于提高分子标记选择的效率具有重要的意义。然而，普通小麦作为异源六倍体物种，其基因组的复杂性为功能基因分子标记的开发带来了极大的困难，因此研究在普通小麦中开发SNP标记同样也具有重要的理论意义。 TaDREB1转录因子是受多种非生物胁迫诱导而上调表达的调节蛋白，在小麦感受逆境胁迫后的基因表达调控网络中起着重要的作用。因此，开发TaDREB1基因的SNP标记，定位该基因对于研究小麦抗旱性的遗传机理和小麦抗旱品种的遗传改良具有重要的现实意义。 本研究以4份六倍体小麦、3份普通小麦的二倍体野生近缘种和1份普通小麦的四倍体野生近缘种、1套以中国春为背景的缺四体和2个小麦遗传作图群体为材料，以TaDREB1基因为研究对象，用直接测序的方法分析了TaDREB1基因的SNPs，设计了基因组特异引物和等位基因特异引物，获得了稳定的等位基因特异PCR产物，成功地开发了SNP标记。本研究旨在开发TaDREB1基因的SNP标记，同时摸索一种在普通小麦中开发SNP标记的可行方法，为加密小麦的遗传连锁图谱，发掘和利用小麦的优异抗旱种质资源提供一条新途径。本实验的主要结果如下： 1、设计了TaDREB1基因的基因组特异引物：P18、P20、P22、P21和P25。并从普通小麦及其四倍体和二倍体野生近缘种的各个基因组上分离到TaDREB1的基因序列。普通小麦3个基因组上所分离的TaDREB1基因序列在GenBank上的注册号分别为：DQ195068，DQ195069，DQ195070。 2、在4个六倍体小麦材料B基因组上的序列之间，检测到了3个SNPs：S608、S705、S732。 3、对于不同的碱基错配类型，在特异引物3'端第二位或第三位加入合适的错配碱基可以获得理想的等位基因特异引物；在引物3'端的第二位和第三位同时加入错配碱基可以完全抑制PCR的扩增；C/T错配强于G/T错配，A/G错配要强于T/G错配。 4、基于S608，设计了一对等位基因特异引物P40。 5、利用所开发的SNP标记P40，将TaDREB1基因定位于3BS，位于Xfam61和Xfba91之间。并用缺四体和Southern杂交予以验证。 6、在普通小麦的演化过程中，各个基因组上TaDREB1基因序列都发生了各自特有的变异。其中以B基因组上的变异最大，D基因组上的未发生变化。另外，各个基因组上该基因的不同部分存在不同程度的碱基变异，这可能与不同部分所受到的选择压力不同有关。
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