牛膝总皂甙的提取及其对小鼠繁殖机能的影响

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中文摘要：牛膝(AchyranthesbidentataBL)为苋科牛膝属多年生草本药用植物，其药用历史久远，广泛分布于我国的河南、山西、山东、陕西等地。近年来对牛膝的研究比较集中在牛膝多糖上，无论是化学成分研究还是药理研究，牛膝多糖都较系统全面，而对皂甙类化合物报道却较少。目前，牛膝皂甙类成分的药理研究主要集中在其镇痛、抗炎、子宫兴奋以及抗着床、抗早孕作用上，其药理活性研究不深入也不系统，作用机制尚处于探索阶段。鉴于牛膝皂甙类抗生育作用的强弱有动物种属的差异，因此，本试验以提取牛膝抗生育活性部位为目的，试图为牛膝皂甙类成分作为新型鼠类抗生育植物药剂的开发利用提供基本依据。 1.牛膝总皂甙的提取分离牛膝皂甙类成分均为三萜皂甙，将40目牛膝粉50％和70％经乙醇冷浸48h提取，乙醚、乙酸乙酯、正丁醇分步萃取，乙醚沉淀、上层析柱洗脱纯化获得总皂甙。萃取后浸膏得率为4.26％左右，皂甙得率达到1.7％左右。 2.牛膝皂甙的定性、定量试验本试验通过显色反应、泡沫反应，结合TLC分析，试验提取的牛膝总皂甙主要是五环三萜皂甙，皂甙元为齐墩果酸，不含有甾体皂甙。采用薄层扫描法，用1mol/L硫酸沸水浴水解7h，在硅胶G薄层板上以氯仿-乙醚-甲醇(30∶10∶1)为展开剂分离，喷以茴香醛硫酸显色剂，在100℃烘6～8min显色，测定出牛膝提取物中齐墩果酸的含量达到71.2％，样品平均回收率为98.5％，相对标准偏差为2.8％。 3.牛膝总皂甙对雌性妊娠小鼠的生殖作用牛膝总皂甙对妊娠期不同生理阶段(着床期、早孕期、中孕期、晚孕期)成年雌鼠灌胃给药处理，每日1次，连续5d。停药48h后剖腹，检查子宫内胚胎数及胚胎、仔鼠发育状况。结果表明，随牛膝总皂甙量的增加妊娠雌鼠体增重降低，终止妊娠率、死胎率升高，晚孕雌鼠妊娠天数缩短，仔鼠体重减轻。中、高剂量牛膝总皂甙作用会引起小鼠肝脏、肾脏和脾脏组织发生病变，而卵巢未见形态上的病理变化。结论：牛膝总皂甙对妊娠雌鼠的繁殖机能影响很大，表现较强的抗雌鼠妊娠活性，其作用于母鼠最佳时期在着床期和早孕期。牛膝的这种药理功效可用于开发新的草药鼠类数量调节剂。 4.牛膝总皂甙对非孕雌鼠的生殖作用牛膝总皂甙对配对前期、哺乳期成年雌鼠灌胃处理，每日1次。配对前期雌鼠连续15d给药，停药48h后雌鼠与雄鼠合笼，观察雌鼠的行为以及12d、20d后剖腹检查胚胎、仔鼠的发育情况；哺乳阶段雌鼠连续5d给药，观察雌鼠的母性行为及回乳天数。结果表明，牛膝总皂甙无抗雌激素样作用，对婚配前雌小鼠处理后，雌鼠生殖系统的影响作用较小，雌鼠均能正常发情、排卵，参与繁殖过程，其性行为、存活胚胎均表现正常，母鼠妊娠率均达到100％，但大剂量处理组妊娠母鼠的胎仔数比其他剂量的处理组显著减少。牛膝皂甙是牛膝下行回乳的作用成分，牛膝总皂甙能够在短短地5d内引起母鼠泌乳停止，相应地引起幼鼠饥饿死亡。 5.牛膝总皂甙对雄性小鼠的生殖作用牛膝总皂甙对成年雄鼠生殖的影响较小，雄小鼠精液品质良好，睾丸无损伤，雄鼠性行为表现正常，均能正常发情，参与繁殖过程。但是，其影响雄鼠的体重增长，随牛膝总皂甙量的增加鼠体增重降低；同时，中、高剂量能引起小鼠肝脏、脾脏、肾脏出现急性炎性反应。牛膝总皂甙具有明显的抑精作用，并存在显著的量效关系，牛膝总皂甙使精子瞬间失活的最低有效浓度为1.8g·L-1，随着药液浓度的降低，其抑精活性逐渐减弱。被TSA制动的精子，经清洗后精子不能恢复活力。 6.牛膝总皂甙对小鼠的适口性测定采用单饲选择摄食法对小鼠进行含牛膝总皂甙饵料接受性试验，1％和0.5％浓度的饵料对试鼠有较好的适口性，摄食系数在0.35～0.6之间，雌雄鼠每日摄入的TSA约在374～527mg/kg左右，能够达到要求摄入的量。

作者：

卜书海

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关键词：

牛膝总皂甙定性试验定量试验繁殖机能适口性测定

授予学位：

硕士

学科专业：

动物遗传育种与繁殖

导师：

李青旺

学位年度：

2006

学位授予单位：

西北农林科技大学

语种：

中文

中图分类号：

Q95