摘要
第一部分 纳米HA/PVA多孔复合水凝胶材料组织相容性的体外试验 目的：通过体外细胞培养的方法，对纳米羟基磷灰石(HA)/聚乙烯醇(PVA)水凝胶多孔复合物材料的细胞毒性和生物相容性进行评价，以了解该复合材料可否作为理想的人工角膜支架材料。 材料和方法：研究材料分为四组：大孔径的纳米HA/PVA复合水凝胶、小孔径纳米HA/PVA复合水凝胶、大孔径的单纯PVA水凝胶及小孔径的单纯PVA水凝胶，用四种材料100％及50％浓度的浸渍液培养兔角膜成纤维细胞， 24h、48h、72h后通过MTT比色法检测各试验组及空白对照组的吸光值(OD)，并计算细胞相对增值率(RGR)，对四组材料的细胞毒性进行评分。同时通过直接接触法，在四组材料表面培养兔角膜成纤维细胞，进行荧光蛋白转染，通过倒置显微镜及扫描电镜观察各组成纤维细胞生长增殖及在材料上粘附、迁移的情况。结果：各个时间点、不同浓度的大孔径纳米HA／PVA复合水凝胶浸渍液的细胞毒性评分均为1级，相对于其余三组材料细胞增殖率高，有显著性差异(P<0.01)。兔角膜成纤维细胞能够在纳米HA／PVA多孔复合水凝胶材料表面粘附、生长繁殖，并向材料孔隙内迁徙，其中大孔径的复合材料比小孔径材料更有利于细胞向孔隙内迁徙。 结论：纳米HA／PVA多孔复合水凝胶材料没有细胞毒性，具有良好的生物相容性，有利于角膜成纤维细胞的粘附、生长及增殖，是一种具有良好临床应用前景的新型人工角膜支架材料。第二部分纳米HA／PVA多孔复合水凝胶人工角膜组织相容性的动物试验 目的：通过动物试验来证实纳米HA／PVA多孔复合水凝胶人工角膜具有良好的组织相容性，能减少植入后的并发症，长期稳定地存在于宿主体内，证实其为理想的新型人工角膜材料。 材料和方法：研究材料分为三组，材料1为大孔径的纳米HA/PVA多孔复合水凝胶人工角膜，孔径为200um；材料2为小孔径的纳米HA／PVA多孔复合水凝胶人工角膜，孔径为100um；材料3为单纯的PVA水凝胶人工角膜，孔径为200um。三组材料光学区域直径为4.5mm，支架部分直径2.5mm，厚度500um，曲率半径7.8mm。选用健康新西兰大白兔21只，随机分为I、Ⅱ、Ⅲ组，每组七只兔，分别板层植入材料1、2、3。通过裂隙灯观察及组织切片HE染色、免疫组化染色观察术后3、8、12、24周人工角膜在兔角膜内的生物学反应。结果：三组兔术后1周左右炎性反应消退，3周均可见新生血管由角膜缘上方向下生长，3-8周为生长高峰期，12周趋于稳定，以后血管变细。 I组炎性反应轻，新生血管出现早，人工角膜稳定性最好。组织切片光镜下观察，8周后大量成纤维细胞增殖并长入人工角膜支架孔隙里，并以I型胶原沉积为主，其中I组成纤维细胞长入及胶原沉积最多。 结论：纳米HA/PVA多孔复合水凝胶人工角膜具有良好的组织相容性，能在宿主角膜内长期稳定存在。其中大孔径材料较小孔径材料更有利于角膜成纤维长入以及胶原沉积，能增加人工角膜植入后的稳定性，减少并发症。大孔径的纳米HA/PVA复合水凝胶人工角膜是一种理想的新型人工角膜。
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