摘要
蜡梅为我国特产的优良冬季香花树种,分布广,栽培历史悠久,品种繁多.本文采用形态标记和ISSR分子标记对98个蜡梅品种和12份保康野生蜡梅材料进行了蜡梅花部表型多样性和遗传多样性分析,旨在为蜡梅品种选育、蜡梅品种分类、系统与进化生物学研究提供理论基础.主要研究结果如下: 1.对110份蜡梅材料进行了花部表型多样性研究,结果为:4个数量性状中花径和中被片长宽比的Shannon信息指数最高,为2.78.17个质量性状中中被片形状的Shannon信息指数最高,为0.99.聚类结果表明,中被片长宽比(形状)在聚类中占有最重要的地位,而中别片开展方式及花色在聚类中占次要的地位. 2.研究了蜡梅叶片不同保存方法对总DNA提取的影响,研究表明硅胶干燥法可以作为野外采集蜡梅叶片时的保存方法,硅胶干燥法提取的总DNA无降解,DNA得率为170μg/g左右.纯度(OD260/OD280)在1.8左右.可以满足分子标记研究的需要. 3.对蜡梅ISSR反应体系进行了优化,建立了适合蜡梅ISSR扩增的体系和程序. 该反应体系为:每20ul体系中含1 × PCR buffer、2.5mmol.1-1MgCl2、0.2mmol.1-1dNTP、0.3ummol.1-1引物、30ng模板DNA、1U Taq DNA聚合酶. 扩增程序为:扩增程序为94℃预变性5 min;94℃变性1 min,52℃～58℃退火1min,72℃延伸1 min 10seconds,35个循环;72℃延伸10 min后4℃保存.扩增产物用2%琼脂糖凝胶进行电泳分析. 4.应用15个ISSR引物对110份蜡梅材料进行了ISSR扩增,获得了100条可统计的条带,其中多态性条带60条,多态性条带比率为60%.平均观测等位基因数为1.5900,平均有效等位基因数为1.3357,平均Nei'S基因多样性指数为0.1936,平均Shannon信息指数0.2892.遗传多样性水平较高.聚类结果为:栽培品种和野生材料分别聚为两大类,栽培品种又按花色分为两类,中被片形状和长宽比相似的品种能够聚在一起,来自相同地区的相似品种易聚在一起.对比ISSR标记和表型标记聚类发现,两者既有明显的差别也有很多相似之处.ISSR标记显示花色在聚类中占有最重要的地位.中被片长宽比(形状)在聚类中占有次要的地位.而表型标记显示中被片长宽比(形状)在聚类中占有最重要的地位.本文结合表型标记和ISSR标记分析,支持将花色在品种分类中作为第一级分类标准.支持将中被片形状作为第二级分类标准.另外花型也可作为较高分类标准,花型在分类中的地位获得了来自ISSR标记聚类和表型标记聚类的双面支持.
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