摘要
本研究选用深绿木霉菌作为出发菌株，首先通过REMI技术(限制性内切酶介导基因整合技术)来构建深绿木霉菌T23菌株的突变体库，以250μg/mL，的潮霉素作为筛选标记，共获得了200个抗潮霉素稳定的转化子。对所获得的转化子进行抗性筛选和生物防治实验，最终确定H6菌株为实验工程菌株，并系统探讨了H6菌株的液体和固体发酵条件，主要结果如下: 1.固体发酵条件的种子液配方:马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，MgS04-7H2O 0.5g/L，FeS04-7H2O 0.0075g/L，MnSO4 0.0025g/L，ZnSO4 0.002g/L，KH2PO4 3.83g/L，NaNO 31.42g/L，(NH4)2SO 41.1g/L，CaCl2 1g/L。固体发酵配料及配置比例:麦麸:腐殖酸钠:玉米渣:稻壳:稻草粉=15:0.75:3:10:10，固料比水为1:0.5(w/v)。固体发酵条件:培养料铺垫厚度为7cm，种子液接种量为20％，发酵温度为恒温28℃，通气量为0.5～0.8Will，每12h发酵罐内翻动培养料1次即可，固体发酵产物中分生孢子含量最高可达1.64×1011个/g，固体发酵产物经40℃烘箱干燥后可直接使用。 2.液体发酵培养基配方:马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，KH2PO41g/L，MgSO4"7H2O0.5g/L，FeS04·7H2O 0.01g/L。液体发酵条件:培养基pH调至4，孢悬液的接种量为0.2％(v/v)，瓶装量为100mL/250mL三角瓶，28℃条件下发酵3d，液体发酵产物中厚垣孢子产量可达1.1×100个/g，高于目前国内外报道的生物量。 3.生物农药的配置方法:液体发酵产物按重量每20mL，与70g载体吸附(吸附剂载体为5:1的硅藻土和轻质碳酸钙混剂)，再加入矿质营养元素10g(KH2PO47g、MgSO41g、CaSO41g、(NH4)6MO7O24·4H2O0.5g、H38O30.2g、MnSO40.1g、FeSO40.1g、ZnSO40.1g)，混合均匀，干燥好制成颗粒剂(生物农药)。 4.生物农药与H6菌株固体发酵产物对黄瓜枯萎病的防治效果分别为95％～100％和95.8％左右(使用剂量为8％)，可见生物农药的生防效果更为突出，且厚垣孢子制剂的货架期长，可更好的满足生产和推广的需要。 5.通过H6突变菌株生防菌剂的盆栽及田间的菌剂施用剂量的筛选，得知最佳的使用比例为8％(与土壤质量比)。 与此同时，本实验通过对黄瓜苗期一定时间内株高和鲜重的测量，以及对其根际土壤的盐度及酸度的测量，发现H6的固体发酵产物除了具有良好的生防能力外，还具有有效改良土壤的盐碱质地和促进黄瓜生长的作用，且使土壤酸度下降的趋势较盐度下降的趋势更为明显。从而体现出此突变木霉菌剂的多功能性，使其更加具有应用推广潜力。
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