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一个多逆境诱导的水稻钙调素相似基因的克隆、表达及遗传转化分析

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为了发现和分离新的植物或作物耐逆基因,以便加以利用来改良作物的耐逆性,达到稳产与高产的目的,我们采用Affymetrix基因芯片系统和包含51,279个转录子的水稻基因组表达芯片分析了超级杂交稻两优培九母本培矮64S全基因组表达模式,发现众多在逆境条件下表达水平显著上调或下调的基因。本论文工作对其中一个受多种逆境诱导表达的基因OsMsr-2(Oryza sativa Multiple Stresses Response Gene 2)进行了研究,得到如下结果: 一.基因芯片数据分析表明,OsMsr-2基因受低温、高温、干旱诱导;在培矮64S的不同发育时期与组织器官中,表达水平均显著提高,平均上调幅度19.92倍,最高上调幅度达68.18倍,最低上调倍数也达到了3.49。 二.用实时定量PCR方法对OsMsr-2基因在低温、高温、干旱等逆境条件下的表达模式进行了进一步分析,所得结果与基因芯片数据基本吻合,从而验证了OsMsr-2基因确实受各种逆境诱导表达。 三.对该基因进行生物信息学分析,发现其ORF(Open ReadingFrame)序列中存在两个EF-hand结构域,类拟于钙调素基因结构。氨基酸序列比对分析表明,该基因与典型钙调素亚族关系最近,对其可能的启动子序列进行分析,发现几个与逆境反应相关的顺式作用元件,可能在水稻的逆境信号转导途径中发挥调控作用。 四.根据GenBank已知相似基因序列设计特异寡核苷酸引物,通过RT-PCR扩增、获得了包含该基因完整ORF的cDNA克隆。 五.构建了该基因的过表达载体。 六.用农杆菌介导法成功将该基因转化到拟南芥中。

徐国云

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诱导 水稻 钙调素 相似基因 克隆 表达 遗传

硕士

植物学

徐孟亮、陈良碧

2008

湖南师范大学

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