预衬修饰脱钙骨组织研究

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中文摘要：目的：采用去细胞加预衬修饰的方法来处理牛脱钙骨，从而来了解其作为组织工程材料细胞黏附特性的变化。方法： (1) 从黄牛长骨两端取出新鲜的松质骨，按照烟台正海生物技术有限公司、中国科学院遗传与发育生物学研究所制备脱钙骨的方法进行处理(申请号/专利号：200610080609)，从而得到实验中所需的牛脱钙骨。 (2) 将牛脱钙骨片截取成合适大小，采用多步骤去垢剂-酶消化法和光氧化交联予以去细胞化处理；以纤维连接蛋白(Fibronectin，Fn)预衬为试验组，而磷酸缓冲液体组(PBS)预衬为对照组，采用物理包裹法(每组成分均以30μl的剂量)对脱钙骨进行预衬处理，共预衬处理去细胞化脱钙骨片18片(裁剪每片面积约1 cm2)。 (3) 每片种植骨髓间充质干细胞株细胞5×105，静态培养7天，取1，4，7天标本表面细胞记数，标本切片HE染色，扫描电镜和透射电镜检测，比较各处理组骨片表面细胞黏附数目、结合程度，来了解预处理方法对增强细胞黏附性和促进细胞生长的影响。结果： (1) 细胞记数：细胞培养7天，预衬组细胞数目明显多于对照组(p<0.05)。 (2) 标本石蜡包埋后切片HE染色结果：第1天各组表面细胞排列密集，紊乱，细胞核有堆积，部分呈双层排布；第4天，对照组骨片表面细胞疏松，有成片分布；预衬组细胞连接成片，呈单层排布。第7天，预衬组细胞细胞铺连成片，与下方纤维结构有连接，未出现表皮脱落。 (3) 取7天标本扫描电镜显示：对照组表面细胞稀疏，细胞间无桥接，与下方的纤维结构联结不明显。预衬组铺连成片，细胞间长梭形有桥接和突起，与去细胞的血管片纤维之间形成连接。 (4)透射电镜：可观察到表面生长的细胞与下方纤维成分有空白带存在. 结论：去细胞加预衬修饰牛脱钙骨可黏附骨髓间充质干细胞；经过Fn，预衬处理的脱钙骨片表面，可增强细胞黏附和贴壁生长.

作者：

唐琪

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关键词：

修饰脱钙骨细胞数细胞培养促进细胞生长预处理方法结合程度细胞黏附电镜检测透射扫描电镜染色切片表面标本静态培养细胞株间充质干骨髓种植

授予学位：

硕士

学科专业：

骨外科

导师：

王万春

学位年度：

2008

学位授予单位：

中南大学

语种：

中文

中图分类号：

R78