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MRI纳米生物探针检测异种胰岛移植免疫排斥反应
聂唯1
作者信息
摘要
目的： 利用抗CD4+抗体标记的纳米免疫磁珠作为MRI生物探针与免疫排斥反应起始因子CD4+T淋巴细胞特异性结合；运用MR对磁珠示踪的方法，试图在分子影像学水平诊断胰岛细胞移植后免疫排斥反应。 材料与方法： 1.将分离纯化以后的2000个猪胰岛细胞移植到Balb/c裸鼠左肾被膜下，建立异种胰岛移植模型；2.待MRI能观察到肾包膜下移植物大小后，将分离的人淋巴细胞注入模型鼠腹腔内，重建人的免疫系统：3.免疫系统重建前及重建成功后3、7、14天，尾静脉注射纳米免疫磁珠30min后行MRI扫描，观察感兴趣区的MRI信号改变：4.立即处死Balb/c裸鼠，取下左肾行病检、免疫组化检查，将检测结果与MRI结果进行比对，分析两者的相关性。 结果： 将分离纯化以后的2000个猪胰岛细胞移植到Balb/c裸鼠左肾背膜下，3周后MRI扫描可显示移植物。 用本中心建立的方法对裸鼠进行免疫系统重建模型的检测：试验组裸鼠腹腔注射107个淋巴细胞2次，对照组裸鼠腹腔注射1ml生理盐水，以上Balb/c裸鼠均于注射后第2天开始隔天注射一次IL-2 2000U，两周后处死检测。可见重建组Balb/c裸鼠肝脾较未重建组明显增大。流式细胞仪检测在未重建组Balb/c裸鼠外周血内几乎未发现CD4-T淋巴细胞，重建组Balb/c裸鼠外周血内发现CD4-T淋巴细胞。取重建组Balb/c裸鼠及正常成年人外周血200ul，抽取DNA后，以人淋巴细胞HLA-Ⅱ恒定区域胞外段序列行PCR扩增(PCR产物长度为260bp)：均可见人淋巴细胞恒定区域胞外段序列扩增产物的表达。以上结果证明Balb/c裸鼠体内人免疫系统重建成功。 Balb/c裸鼠在移植胰岛3周后(免疫排斥模型建立以前)的MR监测可以在左肾移植部位显示移植物，注入纳米磁珠裸鼠移植物局部未显示异常信号；免疫排斥模型建立7天以后，注入纳米磁珠生物探针30min后MRI扫描(T2W序列)显示移植物对应区域信号减低。立即取裸鼠肾脏病检(HE染色及免疫荧光染色)显示移植物局部大量T淋巴细胞浸润，提示免疫排斥反应发生。 结论： 可以通过纳米生物探针MR成像对异种胰岛细胞移植免疫排斥反应进行检测，该方法能实时、客观、准确、无创性的对移植受体免疫排斥反应进行诊断，可早期发现排斥反应局部的变化，为MR分子影像学方法检测早期排斥反应提供了一个全新的思维方向及技术平台。
关键词
纳米/生物/探针检测/异种胰岛移植/DNA/抽取/人外周血/淋巴/流式细胞仪检测/增大/肝脾/腹腔注射/盐水/生理/对照组/试验/重建模型/相关性/比对/免疫组化检查引用本文复制引用
授予学位
硕士学科专业
影像医学与核医学导师
王维学位年度
2007学位授予单位
中南大学语种
中文中图分类号
TH