一株高产漆酶灵芝菌的选育、发酵条件及酶学性质研究

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中文摘要：本文对高产漆酶灵芝（Ganoderma lucidum）菌株的分离筛选、原生质体诱变育种、突变株发酵条件优化、漆酶的分离纯化及酶学性质等进行了较为系统的研究，为利用灵芝生产漆酶打下一定的基础。对从自然界采集的11个样本和购买的7株白腐担子菌进行产漆酶能力检测，从中筛选到1株高产漆酶菌株—灵芝JR（G. Lucidum JR），培养8d酶活达97.01U/mL。以灵芝JR为出发菌株，制备原生质体并进行紫外诱变。原生质体制备和再生的最佳条件是：用0.6mol/L的蔗糖作为稳渗剂，4﹪(w/v)的溶壁酶与2﹪(w/v)的蜗牛酶等体积混合，酶解生长48h的菌丝，酶解温度30℃，pH6.0，酶解1h。用愈创木酚作为初筛试剂，紫外照射后的再生菌落与出发菌株比较，筛选到21株酶活较高的突变株。经过液体发酵，筛选到1株酶活较高、发酵时间较短的突变株JR3010，它是用30W的紫外灯距离40cm照射30s得到的，其酶活达185.08U/mL，比出发菌酶活提高了1.91倍；发酵时间为5d，缩短了3d。研究突变株JR3010的生长及产酶条件，获得酶活最大的培养基组成是：葡萄糖25g/L，大豆蛋白粉10g/L ，KH2PO4 3g/L，MgSO4?7H2O 1.5g/L，VB10.01g/L，最佳初始pH5.0，培养温度28℃，装液量60mL/250mL三角瓶，培养5d酶活达到439.39U/mL，比培养基优化前提高了2.37倍。通过研究金属离子、表面活性剂和底物类似物对菌株产漆酶的影响，发现低浓度的Cu2+、Mn2+、Fe2+对其分泌漆酶有促进作用，浓度高时不仅抑制漆酶分泌，而且抑制菌丝生长；十二烷基磺酸钠（SDS）抑制菌丝生长和漆酶分泌，吐温80对酶的分泌有促进作用；愈创木酚、没食子酸和木质素在低浓度时都能促进漆酶分泌。通过诱变和培养基优化使灵芝JR漆酶活力共提高4.53倍，发酵周期缩短了3d。电泳分析发现，JR3010在优化的培养基中培养只分泌一种漆酶。发酵液经透析浓缩、DEAE-纤维素柱层析，比活力提高24.28倍，酶活回收率是18.66﹪。以愈创木酚为底物酶的Km= 1.94×10-4mol·L-1，Vmax=2.28×10-6mol·L-1·min-1；愈创木酚浓度高时对酶活有抑制作用。K+对酶有激活作用，Cu2+激活作用不大，Fe2+、Co2+、Ca2+、Na+、Ba2+对酶活力有抑制作用。

作者：

王琼波

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关键词：

漆酶白腐真菌灵芝菌紫外诱变育种酶学性质分离纯化

授予学位：

硕士

学科专业：

食品科学

导师：

王岁楼

学位年度：

2005

学位授予单位：

郑州轻工业学院

语种：

中文

中图分类号：