摘要
目的:乙型肝炎病毒代表一组嗜肝DNA病毒的原型，主要引起急、慢性肝炎、肝硬化和肝癌。HBV是目前发现最小的DNA病毒，由不完全的环状双链DNA组成，在长约3200bp的病毒基因组中含有4个开放读码框架(ORF)，2个增强子和一些其它调节序列。ORF有重叠，并且内含调节序列，因而HBV基因是短小而高效的。HBV的逆转录酶缺乏校正阅读功能，HBV的变异率较其它DNA病毒高十倍以上。从1979年Galibert等第一次测定出HBV全基因组序列，迄今发表并收录入Genbank中的160余分离株全序列中，尚未发现两个是完全相同的。1988年Okamoto等基于HBV基因组的差异程度提出了基因型的概念，以全基因序列的同源性>92％或s基因序列同源性>96％为标准，目前已经发现的HBV基因型有8种，即A、B、C、D、E、F、G、H型。近年的研究发现HBV基因型的分布有明显的地区差异，在我国以B型和C型为主。HBV的不同基因型可能代表着不同的复制和变异能力，是病毒变异进化的结果。HBV基因型与乙型肝炎的流行病学特点、临床表现、治疗和预后都有一定关系。随着乙肝疫苗的广泛接种及抗乙肝病毒药物的应用，HBV感染的流行情况得到了一定的控制，但目前大量的现患病人的治疗仍是一个棘手的问题，本研究通过对本地区的HBV基因型检测来了解不同HBV基因型与临床表现、治疗及预后的关系，为乙型肝炎的个体化治疗提供参考。方法:1收集本地区(川南地区)HBV-DNA阳性的慢性HBV感染者血清标本80份，根据同时的临床表现和其他检查资料分为4组:A为慢性HBV携带者组，B为慢性肝炎(轻、中度)组，C为慢性重度、重型或肝硬化组，D为肝癌组。2用型特异性引物-聚合酶链反应的方法对上述80份血清进行HBV基因分型，确定以上血清HBV基因型的构成，了解本地区HBV基因型分布情况。引物序列设计参照Naito H等的方法。内、外引物均根据从presl基因到s基因中保守序列设计，包含A-F6种基因型在内，每条内引物既能很好地代表本型，又能保证不与其他型发生交叉，并使每种基因型的扩增产物片段大小各不相同。首先用一对外引物进行第一轮PCR扩增，再将其他8条引物分为A、B两组，分别扩增A、B、C和D、E、F型，然后把A、B两组扩增产物分别进行电泳，根据片段大小判定基因型。3对不同HBV基因型的上述4组l临床资料使用SPSS10.0软件进行统计学处理，了解基因型与临床表现的关系。采用t检验及X2检验，以P>0.05为无统计学差异，P<0.05为差异有显著性。结果:80例HBV-DNA阳性血清标本中，B型64例(80％)，C型12例(15％)，B+C混合基因型4例(5％)，未发现A、D、E、F型及其他混合型。B、C型的平均年龄分别为30.32±12.89和42.42±15.47岁，差异有显著性(t=2.889，p<0.01)。B、C型的HBeAg阳性率分别为43/64和3/12，差异有显著性(X2=7.528，p<0.01)。B、C型的HBV-DNA水平分别为107.244±1.264和105.619±1.604拷贝/毫升，差异有统计学意义(t=3.915，p<0.05)。B、C型的ALT水平分别为249.38±449.39u/L和199.45±461.80u/L(t=0.352，p>0.05)，AST水平为209.30±408.775u/L和205.90± 367.54u/L(t=0.027，p>0.05)，TBIL水平为47.51±102.77umol/L和31.43±40.73umol/L(t=0.532,p>0.05)，差异均无统计学意义。B、C型在轻、重型肝病的构成比差异有显著性(X2=11.92，p<0.01)。发现的4例B+C混合型有3例为重型肝病，检测的6例肝癌中有4例与C基因型相关。结论:本地区主要的HBV基因型为B型和C型，B型为优势基因型，此外还有少量的B+C混合型，符合我国HBV基因型分布特点，即主要为B型和C型，北方以C型为主，南方以B型为主，D型见于部分少数民族地区如新疆、西藏及沿海地区。HBV基因型与乙型肝炎的临床表现有一定的相关性，B、C型间的ALT、AST、TBIL水平差异无统计学意义，而B基因型的HBeAg阳性率及HBV-DNA水平明显高于C型，C型在慢性重型肝瘸的构成比高于B型，B+C混合型可能更容易导致重型肝病。
NETL