摘要
本项研究以黄花蒿为供试植物，采用不同的溶剂及提取方法对其进行提取；用不同的生物测定方法测定了提取物对五种病原菌的生物活性，并对提取物中的活性组分进行了追踪及初步的分离。1、不同方法提取黄花蒿浸膏四种不同的提取方法提取黄花蒿的各种有机物质，提取率由大到小分别为：微波辅助萃取法＞室温搅拌提取法＞恒温浸提法＞室温浸提法；其中提取率最高的叶的水平行提取物的提取率分别为14.55％、11.84％、11.15％和10.19％。根据实验的成本和应用前景，室温搅拌提取法对提取物的提取经济有效。2、黄花蒿提取率的比较黄花蒿不同部位有机物质的提取率，叶的最高，根次之，茎最低；不同溶剂提取结果表明，水提取物的提取率最高，石油醚I的提取率最低；不同方法提取结果表明，平行提取法优于顺序提取法；黄花蒿叶的水的平行提物的提取率为12.12％，顺序提取物为10.19％；黄花蒿叶的石油醚I的平行提物的提取率为5.56％。丙酮溶剂的平行提取物中，叶的提取率为6.94％，茎的提取率为4.89％，根的提取率为9.63％。3、黄花蒿对烟草及烟草青枯病菌的生物活性黄花蒿的水提取物对烟草青枯病菌有一定的抑制作用，室内生物测定结果表明，3g/L的水提取物对烟草青枯病菌的抑菌圈直径为1.5cm(48h)。不同浓度的黄花蒿水提物对烟草种子的萌发速度存在着不同程度的影响，对烟草幼苗根的生长也有不同的抑制作用，且随着浓度的增大抑制作用加强，浓度大于1g/L的溶液对根长度的抑制作用一直保持在45％以上。田间实验结果表明，黄花蒿茎叶的粉碎物对烟草青枯病有一定的防治效果，但防效并不高；黄花蒿提取青蒿素之后的残渣对烟草青枯病几乎没有效果。4、黄花蒿对四种病原真菌的生物活性室内生物测定结果表明，黄花蒿浸提物对玉米小斑病菌及小麦纹枯病菌具有良好的抑制作用，对烟草赤星病菌及棉花枯萎病菌的抑制效果相对较差：黄花蒿叶的丙酮提取物对玉米小斑病菌的菌丝生长抑制率为83.67％，对小麦纹枯病菌的抑制率为89.55％，抑制中浓度分别为0.2056g/L，0.1828g/L；叶的提取物的抑菌效果优于茎的提取物，根的效果最差；平行提取物的抑菌率高于顺序提取物：各种溶剂提取的黄花蒿提取物对同一种菌的抑制作用差别较大，其中丙酮提取物的生物活性最好。5黄花蒿浸提物的抑菌活性物质的追踪分离采用硅胶柱层析法对黄花蒿叶的丙酮平行提取物进行活性追踪分离，以石油醚(60-90℃)：丙酮(13：1，11：1，9：1，7：1，5：1，3：1，1：1，1：2，1：3)洗脱，控制洗脱剂流速在300mL/h，每40min收集一份，共分离得到48组分。以石油醚(60-90℃)：丙酮=3：1(v/v)作为薄层层析的展开剂，点样；合并活性大小相似的组分，共得到20个组分。进一步活性追踪结果表明，F3组分的活性最好。系统生测的结果表明：3g/L的F3组分对玉米小斑病菌及小麦纹枯病菌菌丝生长的抑制率分别是90.45％，100％；F3对玉米小斑病菌的菌丝生长的EC50值为0.0824g/L，对小麦纹枯病菌抑制菌丝生长的毒力相对较强，其EC50值为0.02230g/L。对F3进一步分离，得到三种活性物质，物质Ⅰ，物质II和物质Ⅲ，采用滤纸片法对三种病原进行测试：物质Ⅱ的1g/L的溶液对玉米小斑病菌和小麦纹枯病菌均有很好的抑制效果，抑菌圈直径直径分别为4.0锄和4.61Acm，说明物质Ⅱ是活性物质，而且主要表现在对病原真菌的菌丝具有抑制效果。活性物质Ⅱ对玉米小斑病菌孢子的萌发具有一定抑制作用，浓度越高，对孢子萌发的抑制作用越大。浓度为1g/L和0.5g/L时，对玉米小斑病菌孢子萌发的抑制率分别为95.33％和79.67％。元素分析和质谱等测定结果表明，具有较高生物活性的物质Ⅱ是青蒿素。
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