摘要
仔猪大肠杆菌性腹泻的主要病原为肠毒素性大肠杆菌(ETEC)，ETEC的致病作用主要由肠毒素和黏附素性菌毛等两类毒力因子共同构成，其主要的致病环节是ETEC通过黏附素性菌毛与小肠黏膜上皮细胞上的特异性的受体相结合，继而增殖并产生大量毒素引起小肠吸收分泌功能失常而导致腹泻。本试验根据ETEC菌毛的致病机理，对各种传统菌毛培养制备方法进行了比较和改良，用制备纯化菌毛蛋白作为抗原免疫初产母鸡，获取到高效价卵黄抗体，并通过喷雾干燥制成粉剂。同位素标记大肠杆菌的粘附抑制试验表明，该卵黄抗体能明显阻断致病性大肠杆菌对肠黏膜蛋白的粘附，具有良好的保护效果。主要研究内容和结果如下： 1．ETEC菌毛蛋白的制备 本研究分别用Minca、BBL、营养琼脂、Slanctz等固体培养基和TSB、LB液体培养基培养987P、K99、K88大肠杆菌，对各菌在上述培养基中不同时间的菌毛蛋白表达量进行比较。结果表明：987P、K99、K88三种菌株在本试验所设各种培养基中培养均能表达菌毛，987P、K99菌株对培养基营养要求较为严格，在固体培养基中37℃培养条件下，987P在Slanctz培养基培养24h、K99在Minca培养基培养48至72h、K88在BBL培养基培养24h或Slanctz培养基培养18至24h均获得最好的菌毛表达效果；在液体培养基中37℃培养条件下，987P、K99、K88菌毛均在TSB培养基震荡培养48h得到最高表达量。 2．菌毛蛋白疫苗免疫鸡卵黄抗体抗体效价的比较 分别用987P、K99、K88菌毛蛋白疫苗、K88大肠杆菌疫苗和987P、K99、K88，F41菌毛蛋白混合疫苗免疫初产母鸡，免疫后收集血清和卵黄，ELISA方法比较菌毛免疫与菌体免疫之间、单价苗免疫与多价苗免疫之间的不同免疫次数的抗体效价水平。结果表明单价菌毛亚单位疫苗的免疫效果优于菌体苗及多价苗的免疫效果，且适当增加免疫次数能提高抗体水平，鸡血清抗体水平略高于卵黄。 3．喷粉工艺对卵黄抗体效价的影响 对所获得的高免卵黄抗体液进行喷雾干燥，ELISA方法检测喷粉前后的抗体效价，结果表明入口温度140℃，出口温度72℃制得的卵黄抗体粉仍保持IgY活性，抗体效价略有降低，即喷雾干燥法对抗体效价不会产生明显影响。 4．卵黄抗体对同位素标记大肠杆菌的粘附抑制试验 以同位素35S-蛋氨酸对ETEC进行标记，通过检测同位素放射量考察卵黄抗体对ETEC的粘附抑制效果，结果表明卵黄抗体能在很大程度上阻断ETEC菌毛对小肠上皮黏蛋白的粘附作用，其阻断率可达93.9％。
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