摘要
目的:藤黄酸(GambogicAcid，GA)是目前较好的抗肿瘤药物之一，对多种癌症均有较明显的治疗作用，在临床上已得到了应用。但其水溶性极差(溶解度小于0．002g／ml)，为了增加其溶解性，本文采用生物降解材料聚乳酸制备了藤黄酸．聚乳酸纳米粒(GA-PLA-NPs)并对其性能及作用进行了初步研究。 方法:本文采用自乳化溶剂挥发法制备GA-PLA-NPs，单因素及多因素实验考察制备过程中各因素对纳米粒的粒径及质量的影响及其规律，紫外分光光度法检测药物含量；透射电子显微镜(TEM)观察纳米粒的形态，激光粒度分析仪测定其平均粒径大小、多分散系数及分布，超速离心后紫外分光光度计测定纳米粒的包封率、载药量及回收率，考察了纳米粒的稳定性及体外释放特性；对其安全性进行了了初步评价。以人肝癌细胞株HepG2为研究对象，采用MTT比色实验法，检测不同浓度的GA和GA-PLA-NPs对肝癌细胞HepG2生长增殖的影响，生长曲线测定药物对细胞增殖的影响，HE染色和相差显微镜观察各组细胞的形态学变化。 结果:制备的GA-PLA-NPs澄清、透明，质量稳定；所建立的测定GA-PLA-NPs溶液中GA浓度的紫外分光光度法方法准确可靠，进样重复性、日内及日间精密度的相对标准偏差均小于0．6％，能满足GA-PLA-NPs制备工艺研究中包封率、载药量及回收率等指标检测的需要。通过单因素考察，发现表面活性剂、有机相、搅拌速度、搅拌时间及蒸发温度、聚乳酸的浓度、表面活性剂浓度、水相与油相体积比、藤黄酸的浓度对GA-PLA-NPs的制备有一定的影响，水相体积的增大、聚乳酸浓度的增大均使GA-PLA-NPs的粒径增大。另外表面活性剂的浓度也对GA-PLA-NPs的粒径及度分散系数有一定的影响。多因素实验中，通过均匀设计实验考察了藤黄酸与聚乳酸的质量比(GA：PLA)、聚乳酸在水相中的浓度(PLA：水相／g／20mL)及有机相与水相的体积比(有机相：水相)等因素对粒径及多分散系数的影响及其影响规律，优化实验结果显示，制备的优化处方为：藤黄酸与聚乳酸的质量比为1：6；聚乳酸在水相中的浓度为70g／20mL水相；有机相与水相的体积比为1：1。 所制备的PLA．NPs在电镜下观察成球型，形态规则完整，较均匀，GA以吸附或镶嵌的形式附着在聚乳酸纳米粒的表面；平均粒径为51．2nm，有95％以上的粒径分布于30～70 nm之间，粒径分布范围较窄，粒径大小均匀，经高速离心，计算得出GA-PLA-NPs的平均包封率为98．87％，平均载药量为13．3％；测定得出平均回收率>99％，RSD为3．37％；制备的GA-PLA-NPs的稳定性良好，具有加速、热、光及长期稳定性；制备的GA-PLA-NPs的体外释药存在两相，前5 h处于突释期，藤黄酸在此阶段累积释放量达30％，此后进入缓释期，24 h后累积释放量达51％。所制备的GA-PLA-NPs的LDso为26．605 mg／kg。比GA原料药的LDso(20．000mg／Kg)大。体外药敏试验显示，与对照组比较，100μg／mLPLA-NPs实验组对细胞没有抑制作用，GA原料药及GA-PLA-NPs对细胞均有明显的抑制作用，测得的IC50分别为1．6377、3．8598μg/mL。 结论:制备出的藤黄酸．聚乳酸纳米粒工艺可行，质量稳定，毒性降低，具有抑制肿瘤的作用，可作为一种新型的药物制剂。
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