摘要
脂肪酸水平升高在非酒精性脂肪肝的发病中具有重要作用。非脂肪组织中脂质沉积导致细胞功能异常甚至细胞损伤称为脂毒性。有研究显示，不同性质的脂肪酸其脂毒性是不同的。本研究分别用不同浓度的油酸(不饱和脂肪酸)、软脂酸(饱和脂肪酸)作用于肝细胞株L02，建立脂肪变性的肝细胞模型；探讨不同性质脂肪酸对脂肪变性肝细胞凋亡、GRP78表达的影响。 方法： 1.采用不同浓度的油酸、软脂酸诱导肝细胞株L02，建立肝细胞脂肪变性的模型。 2.实验分组：正常对照组、DMSO组、软脂酸、油酸处理组。 3.MTI 法[1]筛选软脂酸和油酸对L02 细胞的最佳作用浓度和作用时间。 4.油红O染色光镜下观察细胞内脂滴的变化；TG、MDA、AST、ALT试剂盒检测细胞内TG含量、膜脂质过氧化及肝细胞的损伤情况。 5.流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染检测肝细胞株L02细胞凋亡率；AO/EB染色法观察细胞凋亡形态；Western blot、RT-PCR法检测GRP78蛋白和mRNA的表达。 结果： 1.用油酸、软脂酸分别成功诱导建立L02肝细胞株脂肪变性模型。油红O染色光学显微镜下观察：各时段对照组、DMSO组仅见少许橘红色脂滴，软脂酸各组的肝细胞均可见较多的橘红色脂滴，油酸各组的肝细胞可见大量橘红色脂滴，随培养时间延长更为显著，同时伴有脂滴融合现象。 2.与对照组和DMSO组比较，软脂酸组、油酸组培养上清中的TG、MDA、AST、ALT逐渐升高(P＜0.05)。 3.AO/EB染色、ANNEXIN V FITC/PI双染检测均显示：油酸组和软脂酸组的细胞凋亡率随培养时间延长逐渐升高，在48、72h时，二者与对照组和DMSO组比较，差异具有显著性；软脂酸组凋亡率高于油酸组，差异也具有显著性(P＜0.05)。 4.Western-blot、RT-PCR结果均显示：各组GRP78蛋白和mRNA均有不同程度的表达，但是，在24、48、72h时，软脂酸组的GRP78蛋白和mRNA表达均比对照组、DMSO组和油酸组明显增加(P＜0.05)。 结论： 1.不同性质的脂肪酸均可导致L02细胞发生以甘油三酯升高为特征的脂肪变性，软脂酸比油酸更易引起脂变肝细胞的转氨酶释放、MDA产生增加以及细胞凋亡，提示饱和脂肪酸的脂毒性更强。 2.两种类型的脂肪酸均可引起不同程度的肝细胞凋亡。饱和脂肪酸可能通过上调葡萄糖调节蛋白78表达，启动内质网应激从而诱导脂肪变性的肝细胞凋亡，而油酸不能影响GRP78的表达。
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