摘要
目的：伊立替康(irinotecan,CPT-11)是喜树碱的水溶性衍生物，是用于肿瘤治疗的喜树碱类中上市的药物之一。由日本研究开发。该药已获得FDA和欧盟的共同批准，可用于治疗小细胞肺癌、百小细胞肺癌、子宫颈癌、卵巢癌、结直肠癌、恶性淋巴瘤、急性粒细胞白血病、急性淋巴细胞白血病等。CPT-11于2001年3月在我国上市。目前市场提供的是盐酸伊立替康静脉滴注浓缩液，药物名称为开普拓(Camoto)。然而伊立替康在应用中存在某些较严重的不良反应，如骨髓抑制：本品可致白细胞、血小板减少，贫血及骨髓严重抑制或合并严重感染；胃肠道反应：恶心呕吐、腹痛、肠麻痹、口腔炎等；重症腹泻可致水电解质紊乱，循环衰竭；乙酰胆碱综合征；肝肾功能损害等。 脂质体(Liposomes)是一种类似于生物膜结构的双分子层微囊，是一种定向药物载体，属于靶向给药系统(Targetingdrug delivery system，)的一种新剂型。进入人体后主要被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封药物的体内分布，使药物主要在肝、脾、肺等组织器官中积蓄，并优先聚集在感染、炎症、肿瘤等部位，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。 基于以上考虑，本研究采用CPT-11为模型药物，制备其脂质体，以使所输送药物定向释放、减少药物的治疗剂量、降低药物的毒性、使所包裹药物长效化等。 方法：在预实验的基础上初步确定伊立替康脂质体的制备方法和处方，然后通过单因素考察初步确定影响脂质体制备的因素。伊立替康脂质体的制备：对伊立替康脂质体的制备方法进行研究，采用薄膜分散法、乙醚注入法、硫酸铵梯度法这三种方法制备脂质体，利用葡聚糖凝胶柱对脂质体与游离药物进行分离，测定脂质体中伊立替康的包封率，确定硫酸铵梯度法为伊立替康脂质体的制备方法。 以包封率为指标，通过单因素考察优化脂质体的制备工艺，并考察磷脂与胆固醇质量比、药物与磷脂质量比、硫酸铵浓度、孵育温度、孵育时间等对脂质体的影响。在此基础上，采用四因素三水平正交试验设计对各因素的水平进行筛选，采用极差分析对各个处方进行评分，最后确定伊立替康脂质体的最佳处方。 分别绘制伊立替康脂质体和伊立替康溶液的体外释放曲线，比较其体外释药过程，并用零级、一级、Higuchi和Weibull方程进行拟合，考察相关系数。以粒径、外观、颜色作为指标，考察伊立替康脂质体的稳定性。 选用大鼠和小鼠作为动物模型，采用高效液相法分别对伊立替康溶液和脂质体进行体内药物动力学及体内分布情况研究。液相条件：色谱柱：DiamonsiLTM ODS C18(钻石)250×4.6mm，5μm；预柱：YWG2 C18 10×4.6mm；以乙腈：柠檬酸缓冲液(2.1％的柠檬酸水溶液，用30％的氢氧化钠溶液调至pH为3.8，含0.2％三乙胺)40:60v/v为流动相；荧光检测激发波长为370nm，发射波长为530nm；柱温：30℃；流速：1ml/min。进样量为20μl。采用统计矩的方法进行结果处理，计算大鼠体内各种药动学参数，考察伊立替康脂质体在小鼠体内分布，并进行靶向性评价。结果：硫酸铵梯度法所制备的脂质体包封率较高，通过正交设计确定最佳处方条件为：磷脂400mg，胆固醇133mg，伊立替康40mg，硫酸铵浓度0.2mol/l，孵育温度55℃。所制备伊立替康脂质体包封率为90.37％，载药量为6.27％，pH值为6.20，在光镜和透射电镜下呈类圆形和椭圆型，平均粒径为215.7nm。 伊立替康脂质体和伊立替康溶液的体外释放曲线：分别用零级、一级、Higuchi和Weibull方程进行拟合，并考察相关系数。伊立替康溶液体外释药符合Weibull方程，为1n[-1n(1-Q)]=0.81011nt-0.8293，r2=0.9934。脂质体体外释药符合零级动力学方程，为Q=0.0077t+0.0455，r2=0.9949。药物溶液T50及Td分别为1.77h、2.78h脂质体的T50及Td分别为59.03h、76.17h，由此可见，伊立替康脂质体较其水溶液具有缓释作用。 稳定性结果显示：脂质体在加热条件下不稳定；在25℃条件下贮存1个月，包封率有较大下降，脂质体沉淀分层明显；在4℃条件下贮存1个月，包封率下降9.8％，粒径变化较小，稳定性较好，说明脂质体需在冷藏条件下保存。 药动学实验表明：伊立替康溶液和脂质体静脉给药后，均存在肝肠循环(Enterohepahc circulation，EHC)。脂质体组消除速率常数k为0.2150h-1，溶液组的k为0.3997h-1，说明制成脂质体后伊立替康在大鼠体内的消除减慢。脂质体组血药浓度.时间曲线下面积(AUC)为539.25μg·h·ml-1，溶液组AUC为234.83μg·h·ml-1，说明药物制成脂质体后，有利于提高药物疗效。 小鼠体内分布实验表明：伊立替康脂质体较溶液对心、脾和肺靶向性提高，脂质体组中心、脾、肺的re分别为3.13、4.76、2.56，说明脂质体经静脉注射后能够浓集于心、脾、肺组织，起到了一定的靶向目的。 结论：以抗肿瘤药物伊立替康为模型药物，以卵磷脂、胆固醇为主要材料，采用硫酸铵梯度法制备的脂质体给药系统，制备工艺简单，重现性好，质量可控，可提高药物靶向性，从而降低毒副作用，丰富了脂质体给药系统研究内容。
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