摘要
第一部分实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)动物模型的建立。 目的：利用乙酰胆碱受体(AChR)单克隆抗体mAb35，采用预实验成功建立MG动物模型的最佳剂量(1.0mg/Kg)，腹腔注射(ip)给C57BL6(B6)幼年小鼠，建立实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)动物模型，并鉴定模型建立是否成功。为进一步研究MG的发病机理及其相应的免疫治疗方法提供实验动物模型。 方法：将实验组分为2组(模型组M和正常对照组C)，模型组(M)C57BL/6幼年小鼠经腹腔注射含mAb35 1.0mg/kg的Ringer's液0.2ml，对照组(C)小鼠经腹腔注射不含mAb35的Ringer's液0.2ml。对小鼠进行临床表现的观察，低频重复电刺激检查(RNS)，EIJSA法检测血清中的AChR-Ab水平，以判断模型建立是否成功。 结果：经腹腔注射含mAb35的Ringer’s液12～24h后，大部分模型组小鼠出现体重减轻、活动减少、肌力降低等MG临床症状，而正常对照组小鼠活动、摄食如常，无1例出现临床症状。模型组小鼠表现肌无力和易疲劳的临床表现，同时伴有肌电图衰减、新斯的明试验阳性、血清学中AChR-Ab升高的实验室检查结果，所有这些均与MG患者的临床表现和实验室检查结果相似，也符合MG的病理生理特点。结论：C57BL/6小鼠为建立EAMG动物模型的敏感品系。利用AChR单克隆抗体mAb35可在幼年C57BL/6小鼠成功建立EAMG模型，其有效剂量为1.0mg/kg，该方法简便、可靠，为研究儿童MG提供了一种很好的实验动物模型。 第二部分重症肌无力幼鼠经鼻粘膜耐受的免疫学机制研究。 目的：采用特异性耐受原一双类似物(Lys262-Ala207)，在不同时间点对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)幼鼠进行鼻粘膜给药，观察临床表现、免疫学指标的改变情况，评价其临床疗效、探讨鼻粘膜耐受对EAMG的预防效果及作用机制，以期为儿童MG的治疗提供一种理论依据，为临床探索MG的防治方法开辟一条新的途径。 方法：应用单克隆抗体mAb35腹腔注射致敏C57BL/6(B6)幼年小鼠建立EAMG模型，选取双类似物Lys262-Ala207作为耐受原在致敏前10d(预防耐受组A)及致敏当日(预防耐受组B)给予含有25μg耐受肽的PBS 50μL鼻腔给药，每个鼻孔25μL，连续10d。而相应对照组CA、CB按照相同时间程序，鼻饲含有等量不含耐受肽的PBS50μL，每个鼻孔25μL。检测实验各组小鼠体重、观察临床评分、低频重复电刺激检查(RNS)，检测血清抗AChR-Ab水平以及IL-lO、IL-4和IFN-γ分泌细胞含量变化和小鼠脾脏单个核细胞(MNC)中CD4+CD25+调节性T细胞的变化情况。 结果： (1)A、B两组小鼠未出现体重下降而临床症状明显轻于相应对照组，且A组临床症状轻于B组。 (2)神经电生理检查：A、B两组低频重复电刺激(RNS)出现衰减反应D5阳性率低于各自对照组。 (3)A、B两组小鼠血清中乙酰胆碱受体抗体AChR-Ab的水平明显低于各自对照组，且A组轻于B组。 (4)A、B组实验小鼠血清中IL-4、IFN-γ、IL-10分泌细胞含量均低于各自对照组，且A组低于B组。 (5)实验小鼠脾脏MNC中调节性CD4+CD25+Tr细胞含量A组明显高于B组，且A、B组明显高于各自对照组。 结论： 1.双类似物(Lys262-Ala207)经鼻粘膜耐受对预防实验幼鼠发生EAMG具有较好的效果，除临床症状较轻外，且伴有特异性T细胞、B细胞免疫功能的抑制，即：血清AChR-Ab含量明显减少，外周血中IL-4、IFN-γ、IL-10分泌降低，CD4+CD25+Tr细胞含量明显增加。 2.双类似物(Lys262-Ala207)经鼻粘膜耐受可下调针对AChR自身免疫反应的作用，不同的时间点预防耐受效果不同，致敏前优于致敏时耐受，提示自身免疫反应一旦启动再给予耐受的疗效要逊于自身免疫反应启动前耐受治疗。 3.本研究证实双类似物经鼻粘膜耐受治疗EAMG有效、给药途径方便安全，为抗原特异性免疫治疗MG及其他自身免疫性疾病(AID)的可行性提供了理论依据，也为其应用于儿童MG的治疗展示了广阔的前景，但仍有许多问题尚待需进一步研究和探索。
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