摘要
甲状腺激素通过与广泛分布在各种组织中的甲状腺激素受体(TRs)结合，作用于转录过程，实现其对靶基因的正性/负性调节，对于机体的正常分化发育和代谢平衡具有十分重要的作用。TRα和TRβ基因产生的转录本(transcript)因选择性剪接或转录起始位置的不同而产生若干同功体(isoform)。在已报告过的大鼠TRs：TRα1、TRα2、TRα3、TR△α1、TR△α2、TRβ1、TRβ2、TRβ3和TR△β3等9种亚型外，我们又发现了一个新的同功体，被NCB1名为TRβ△。 本文对新发现的TRβ△进行了初步的研究。在克隆表达TRβ△蛋白并经氨基酸分析证明从mRNA推测的氨基酸序列正确后，我们首先运用生物信息学的方法对甲状腺激素受体新同功体TRβ△蛋白进行了初步分析，得到了蛋白质组学研究中感兴趣的一些蛋白质基本参数，包括分子量、等电点、氨基酸残基的组成、疏水性、跨膜区、三维结构、亚细胞定位、功能等基本信息，从而对TRβ△蛋白的基本结构和特点有所了解，为进一步对TRβ△的研究打下了基础。TRs不同亚型在组织中广泛表达，但是各亚型的表达和分布也有一定的组织和发育阶段特异性。为此我们研究了TRβ△的时特异性表达。我们分别取10.5、14.5、16.5、18.5天胎鼠和新生鼠的脑、心、肝三种组织，使用荧光定量PCR方法检测TRβ△mRNAs水平。结果发现大鼠不同胚胎期不同组织中TRβ△mRNAs水平有明显差异，脑组织TRβ△的表达在14.5天时达高峰，随后有所下降，然后在18.5天时又升高，随即下降。而心脏恰好相反，TRβ△的表达在胚胎早期10.5天处于高水平，然后下降，在16.5天时升高，随后下降，并与出生后一致，处于较低水平。肝脏总体TRβ△的表达量均高于脑组织和心脏，在14.5天和16.5天一直处于较低水平，在晚期(18.5天)明显升高，出生后有所下降，但仍维持较高水平。为了深入研究甲状腺激素受体基因转录本的剪接，研究TRβ△的产生机制，我们构建了TRβ△小基因模型真核表达载体。截取了甲状腺激素受体TRβ基因外显子3的3'端部分、内含子3-4全长、以及外显子4的5'端的部分序列共约6493bp的基因组DNA片段，并克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体中，然后将TRβ△小基因重组质粒成功转染进入HeLa细胞，提取HeLa细胞的mRNA，RT-PCR结果显示：TRβ△小基因在HeLa细胞中被成功转录并剪接为相当与TRβ1和TRβ△两种同功体，而pcDNA3.1(+)转染HeLa细胞，及未转染的HeLa细胞只产生相当与TRβ1的片段。因此说明TRβ△是TRβ基因转录本或pre-mRNA的一种新的剪接体。TRβ△是我们新发现的一种甲状腺激素受体同功体，甲状腺激素受体属于核受体超家族的成员，常与类视黄醇X受体(RXR)组成TRs/RXR杂二聚体的形式，特异结合细胞核内靶基因序列中的甲状腺激素应答元件(TREs)。为了检测甲状腺激素受体新亚型TRβ△是否有此生物学功能，我们将RXRα与TRβ△克隆到共表达载体中进行表达，并运用EMSA的方法检测TRβ△单体、TRβ△/RXRα杂二聚体是否能与TREs结合。结果显示：我们成功构建了RXRα与TRβ△的双基因共表达载体pETDuet-1/TRβ△/RXRα，而且RXRα可与TRβ△结合，二者形成的杂二聚体也能够与TREs(DR+4)结合。即：此新亚型具有DNA结合活性，并可与其它核受体对话，其杂二聚体也能与TREs(DR+4)结合。
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