摘要
人的胚胎干细胞(ES细胞)来源于着床前人囊胚的内细胞团，具有自我更新和向外、中、内三胚层不同组织细胞分化的潜能，因此它具有重要的基础研究价值和巨大的临床应用前景，可应用于人早期胚胎发育过程的研究、药物毒物筛选、细胞移植治疗、基因治疗等领域。目前，世界上已经建立了多株人胚胎干细胞系，最早建立的人胚胎干细胞系是以小鼠胚胎成纤维细胞(mouseembryonicfibroblast，MEF)作为饲养层，或在一种胞外基质如Matrigel上用MEF细胞的条件培养基进行培养的。这种培养方式虽然能有效地维持人胚胎干细胞的自我更新，但由于培养体系中含有动物源性成分，这些成分可能引起动物源性病原体或支原体的污染，从而在很大程度上限制了人胚胎干细胞将来在临床上的应用。本课题的目的就是寻找与建立不依赖MEF饲养层细胞，无血清，无动物源性物质，成分明确且稳定的能够维持人胚胎干细胞体外培养和扩增的培养体系。 要想早日实现人胚胎干细胞的临床应用，去除培养体系中的动物来源成份是一个急需解决的问题。目前建立一个无任何动物来源的成分明确的培养体系已经成为干细胞研究领域中的一个热点问题。在本研究中，我发现用了N2和B27代替原先培养基中的KSR，加入bFGF，并以纤维连接蛋白；纤维连接蛋白和玻璃粘连蛋白；纤维连接蛋白和四型胶原中的任意一种人源基质作为支持物，都可以长期维持人胚胎干细胞的体外培养和扩增。用这个培养体系培养的人胚胎干细胞能够正常长期传代，保持了正常的未分化状态、核型以及向各胚层分化的多潜能。同时在这种培养体系中培养的人胚胎干细胞凋亡率低，增殖速度快，使得在这种体系中培养的人胚胎干细胞很容易可以扩增以满足临床的大批量需求。 该研究结果最终发展建立了维持人胚胎干细胞体外培养和扩增的无饲养层细胞、无动物源性物质、成分明确且稳定的培养体系，不仅满足了将人胚胎干细胞或其分化产物应用于临床的条件，而且有助于揭示调控人胚胎干细胞自我更新过程的信号通路和分子机制。
NETL