摘要
激活蛋白(ActivatorProtein)是一类源于真菌的新型蛋白激发子，前期研究发现该蛋白激发子具有诱导植物抗性和促进植物生长的作用。本研究以灰葡萄孢菌为实验材料，首次从中提取出一种分子量为35kDa的激活蛋白，生物活性测定表明，该蛋白可显著提高烟草悬浮细胞过氧化氢含量的增加，并可促进豌豆幼苗生长，提高番茄对灰霉病的抗性。灰葡萄孢菌源激活蛋白的发现丰富了激活蛋白家族，为激活蛋白作用机理的深入研究奠定了基础。 1.首次利用AKTA(GEexplorer10)纯化出灰葡萄孢菌激活蛋白：先经HitrapQFF离子交换柱层析，再利用HitrapSuperdex75分子筛层析进一步纯化：经SDS－PAGE电泳检测得到35kDa的单一条带，该蛋白可显著促进烟草悬浮细胞过氧化氢含量的增加，说明利用该方法可分离出灰葡萄孢菌激活蛋白。质谱鉴定出三条肽段信息：该纯化蛋白的两条肽段NILFVINQPEVYK,SPTSNTYIVFGEAK与脉胞菌的肽段2-3高度相似，同时，肽段序列SPTSDTYVIFGEAK与水稻alpha-NAC蛋白gi｜46575976保守序列相同；肽段ESTLHLVLR经比对与泛素化蛋白gi｜2551中多肽序列同源。 2.生物活性检测结果首次证明了该蛋白不仅能促进豌豆幼苗的生长；还可有效抑制番茄灰霉病，结果表明，经灰葡萄孢菌激活蛋白处理的幼苗叶片病指由16.02下降到7.31，病叶率降低21％，控制效果达50.51％；此外，研究发现，该蛋白还可诱导豌豆幼苗的醇脱氢酶活性的提高，说明灰葡萄孢菌激活蛋白可增强植物的抗涝性。 3.成功利用磁珠构建出灰葡萄孢菌cDNA文库：得到库容总量为8.8×107，滴度为8.8×106cfu/ml，阳性克隆率为98.6％，平均插入片段大小超过1200bp的高质量cDNA文库。 4.用简并引物通过PCR扩增灰葡萄孢菌总cDNA，得到261bp的基因片断，待验证其可靠性后，下一步实验再将其作为探针，从cDNA文库中调取全长基因，为获得灰葡萄孢菌激活蛋白全长编码基因奠定了基础。
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