摘要
纳豆芽孢杆菌已被我国饲料主管部门批准为微生物饲料添加剂，但是将其做为奶牛饲用微生物的使用效果还缺乏研究。为此，本论文对纳豆芽孢杆菌菌株的纯化与生长条件、在人工瘤胃中对瘤胃微生物发酵的影响和饲喂犊牛效果三个方面进行了初步研究。通过多种培养基的筛选、生长曲线测定筛选出4号菌株，并对其发酵条件进行优化。利用生理生化试验参照《伯杰斯细菌鉴定手册》和16SrDNA基因序列分析鉴定该菌株，结果表明4号菌为枯草芽孢杆菌亚种(Bacillussubtilissubspsubtilis)。筛选的最佳培养条件组合为葡萄糖1％、蔗糖1％、大豆蛋白胨6％、胰蛋白胨4％、接种量2％、装液量5ml/100ml，该组合菌液在180r/min，37℃条件下发酵24h时，660nm吸光度值达到1.1475。本试验筛选的最佳培养条件为180r/min和37℃。小试扩繁中液体发酵和固体发酵结果比较稳定，单位细菌数均在1010cFu/ml。固体发酵的最佳培养时间为36h。人工瘤胃评价结果表明。添加1％和5％的纳豆芽孢杆菌均提高了瘤胃液中挥发性脂肪酸各成分含量，表明其具有提高瘤胃微生物消化代谢碳水化合物的能力。纳豆芽孢杆菌培养物对人工瘤胃的pH值、NH3-N、MCP和挥发性脂肪酸都有不同程度的影响，主要表现在添加1％和5％纳豆芽孢杆菌培养物后，pH值显著高于对照组，可提高瘤胃液的pH值；添加5％纳豆芽孢杆菌培养物使NH3-N浓度显著高于对照组，添加1％的纳豆芽孢杆菌，在培养13h后NH3-N浓度低于对照组；添加1％和5％纳豆芽孢杆菌培养物后，乙酸、丙酸、丁酸和总挥发性脂肪酸含量与对照组相比显著增加，表明其具有提高瘤胃微生物消化代谢碳水化合物的能力。添加纳豆芽孢杆菌培养物使瘤胃内环境NH3-N浓度较高，MCP值显著降低，这一结果表明，纳豆芽孢杆菌培养物与瘤胃微生物菌群存在互作关系，需要进一步研究纳豆芽孢杆菌培养物与瘤胃内不同种类细菌以及原虫之间的消长机理。选取14头7日龄中国荷斯坦奶牛公犊牛，随机分为2个处理组，向所饲喂的牛奶中添加纳豆芽孢杆菌培养物，连续饲喂直到自然断奶。研究添加的纳豆芽孢杆菌对断奶前犊牛生长状况、生产性能、断奶日龄等的影响。结果表明，在不影响犊牛正常生长发育的基础上，断奶前犊牛日增重较对照组提高26.5％(P<0.01)；开食料的日采食量较对照组下降11.9％；与对照组(57d)相比，处理组能够提前断奶(49.7d)，且差异显著。由此可见，纳豆芽孢杆菌微为奶牛的饲用微生物具有潜在的应用前景。
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