摘要
逆境胁迫是目前农业生产上面临的严峻问题之一，逆境会导致植物体内产生大量的活性氧。活性氧可引起蛋白质、膜脂和其他细胞组分的损伤，进而导致细胞及组织死亡。谷胱甘肽还原酶作为植物活性氧清除系统中的一个关键酶，对于保护植物免受活性氧的破坏具有十分重要的作用。本研究从番茄叶片中分离到叶绿体谷胱甘肽还原酶基因，并对该基因的表达和功能进行了分析。主要结果如下： 1.利用同源序列设计简并引物，通过RT-PCR的方法从番茄叶片克隆到谷胱甘肽还原酶基因的中间片段，通过5’-RACE和3’-RACE分别克隆到5’和3’片段，拼接后设计特异引物扩增到全长cDNA，命名为LeGR(EU285581)。该基因全长为1772 bp，ORF为765 bp，编码255个氨基酸，分子量约为33 kDa。同源序列比较表明，番茄谷胱甘肽还原酶基因的序列与烟草、拟南芥、水稻、豌豆、芸苔的谷胱甘肽还原酶基因的序列同源性较高。 2.Northern杂交分析显示，LeGR在不同器官中呈非特异性表达，在叶片、茎、花萼等叶绿素含量高的组织中表达量较高。 3.LeGR受低温和高温诱导，其表达量明显高于常温下，且其表达水平随逆境处理时间的延长而变化。4℃处理下6 h表达量最高，40℃处理下12 h表达量最高。 4.将获得的LeGR与含有35S启动子的pBI121载体重组，分别构建了正义和反义表达载体，利用农杆菌介导的叶盘法转化番茄。 5.构建了原核表达载体pET-LeGR，并在大肠杆菌BL21中表达融合蛋白，SDS-PAGE电泳结果显示，表达蛋白符合预计分子量。
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