摘要
本文首次将荧光原位杂交技术(Fluorescence in situ hybridization，FISH)用于青岛文昌鱼染色体基因定位研究，确立了青岛文昌鱼染色体荧光原位杂交的技术体系，并且对18S rDNA和核糖体蛋白L19和S19基因进行了染色体基因定位及荧光显带基因定位的研究。 青岛文昌鱼杂交体系为：鲑鱼精DNA超声波打断处理20min；采用5 ng/μL的蛋白酶K处理3～5 min和10 ng/μL RNA酶处理1h进行预处理；封闭DNA采用100～300倍探针浓度的鲑鱼精DNA；50％甲酰胺/2×SSC，1×SSC，2×SSC，42℃的洗脱严紧度；3％BSA进行抗体封闭；杂交温度保持37℃；杂交时间可以控制在12～18 h之内；PI复染量20μl/片。 青岛文昌鱼18S rDNA染色体FISH基因定位信号数为2～6个，主要分布于4条染色体上：1号染色体近着丝粒区，2号染色体长臂近末端区，8号染色体长臂中部，12号染色体着丝粒区。同一染色体杂交信号检出频率不同，荧光信号强弱也不同。2号、8号、12号杂交信号较强，1号杂交信号较弱。12号染色体信号检出频率最高，8号次之，1号和2号检出频率较低。在8号和12号染色体的两条同源染色体上均可以同时检测到信号。1号染色体通常只在一条同源染色体上检测rDNA荧光信号。2号染色体因为可能为性染色体，染色体差异较大，因此定位结果也不一致。 青岛文昌鱼染色体荧光显带结果显示DAPI带与文昌鱼C带近似，表明文昌鱼染色体异染色质区含AT碱基高；PI-R带显带与常规R显带带型基本一致，表明文昌鱼R显带与GC含量相关。18SrDNA荧光显带FISH定位结果显示，杂交信号位于DAPI带2q17，8q12，12q11带；PI-R带1q11，2Aq24，2A'q24，8q13，12q11带。 核糖体蛋白RPL19和RPS19定位结果均显示一对信号。RPL19基因初步定位结果显示存在于4号染色体末端。
NETL