摘要
目的：建立适合大规模生产化的重组人促红素(rhEPO)注射液制造新工艺,为国内外患者提供质优价廉的重组人促红素注射液。 方法：通过对重组人类EPO基因的细胞株(CHO EPO-2)的细胞培养工艺与纯化工艺研究,寻找一条适合规模化生产的工艺路线。其中包括适合培养基配方的筛选研究、生物反应器工艺参数的优化研究、蛋白纯化层析介质的选择与层析条件的研究,考察上述工艺中影响放大生产的限制性因素与环节,采用新的工艺与新的技术,突破原有工艺的限制性因素与环节,确定了无血清培养基为：DMEM+EX-CELL302,添加微量其他营养成分,提高rhEPO糖基化程度,使rhEPO表达量提高到8000IU/ml以上；优化生物反应器工艺参数使细胞存活周期达到两个月左右；同时纯化工艺中用离子交换层析替代C4反向层析,简化了操作流程,放大了生产规模。最终形成重组人促红细胞生成素注射液大规模生产的优化工艺。 结果：重组人促红素注射液制造新工艺生产的rhEPO纯度达到99％以上,比活(包括体内、体外)为1.8×105IU/mg以上,活性回收率为40％,相对分子量为37000～40000左右,唾液酸含量大于10mmol/molEPO以上,等电点为3.75-4.25。 结论：该制造新工艺操作简便、重复性好、产品质量高,单批产量大,适合大规模生产。
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