摘要
皮肤的创伤愈合是一个复杂的生物学过程，启动一系列复杂的生物学事件。包括炎症、组织新生。组织新生包括角朊细胞在伤口边缘的迁移与增殖，角朊细胞通过迁移，完成再表皮化(re-epithelialization)，形成新生表皮。细胞迁移是创伤愈合中的一个关键环节。既往的研究侧重于细胞水平(Invitro)上的机制研究，然而，迄今为止，关于皮肤创伤愈合中MEKK1/JNK通路在载体(Invivo)水平上的信号机制尚不明了。为了进一步探讨MEKK1/JNK信号通路在皮肤创伤闭合中的分子机制，我们开展了相关研究： 全文分两部分：第一部分 小鼠创伤愈合新生皮肤组织切片的制备 为了更好的开展机制的研究，我们首先对相关技术条件进行了探索。创伤愈合后新生皮肤较正常皮肤稚嫩，在制作HE组织切片整个过程中都要仔细轻柔操作，避免暴力。经过摸索，发现：①取材：取材时不要过度牵拉切口周围正常的皮肤，并且切口周围的皮肤多取一些。②固定方法：皮肤用4％的多聚甲醛固定效果好。③脱水、透明：这是至关重要的步骤。50％酒精脱水2小时、70％酒精过夜，80％、90％、95％酒精，无水乙醇I、II各1小时。后用吸水纸吸干表面水分后投入到无水乙醇和二甲苯1:1混合液中透明2分钟，放置到纯二甲苯I中10分钟，二甲苯II中5分钟。④浸蜡包埋：浸蜡一般采取4步法。第一杯浸蜡30分钟，第二杯和第三杯各1小时，第四杯30分钟。此过程在60℃恒温箱中进行。⑤切片、摊片、烤片：切片时右手握持切片机摇把用力要均匀，才能保证切出的片子厚度均一。⑥HE染色：白片经二甲苯I10分钟，二甲苯II5分钟脱蜡后再经梯度酒精脱水，皮肤组织切片一般在苏木精中染30分钟左右，盐酸酒精分色采取将片子快速浸入新盐酸酒精中两下，约2-3秒，伊红染液浸入5秒。这样制作的切片较一般常规正常皮肤组织切片制作方法上不但节省时间，且皮肤创伤愈合再上皮化形态完整。 第二部分 MEKK1/JNK信号通路介导活化素B对皮肤创伤愈合的调控 前期在细胞水平发现：MEKK1通过介导活化素(activin，ACT)信号，调控表皮细胞移行，提示MEKK1可能是介导Activin信号，使组织伤口愈合和表皮再上皮化的一个原因。因此，在前期研究的基础上，首先在细胞水平上对ActivinB浓度进行了探索，发现不同浓度的ActivinB对伤口闭合作用不一，10ng/ml的细胞因子ActivinB作用可使细胞创伤闭合效应达到最佳。进一步，用相同浓度的ActivinB和ActivinA作用细胞创伤模型，发现ActivinB对细胞创伤后闭合速度明显快于ActivinA，闭合率明显高于ActivinA。继而载体实验显示：ActivinB能加速小鼠创伤后表皮组织愈合。创面注射10ng/ml浓度的ActivinB的小鼠，新生的表皮组织结构完善，皮肤附属器--毛囊生成良好。进一步实验显示：皮肤创伤愈合过程中，ActivinB是通过MEKK1通路调控创伤闭合的，并且这一信号直接传递到MEKK1下游信号分子JNK通路，而不依赖于p38与ERK通路。 研究提示：在皮肤创伤愈合过程中，MEKK1/JNK信号通路可能通过介导活化素B(ActivinB)信号对皮肤创伤愈合起调控作用。
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