摘要
冠心病(coronaryheartdisease，CHD)是当今严重危害人类健康最主要的疾病之一。目前CHD的发病机制尚不十分清楚，研究与其相关的危险因素尤为重要。现己知传统的危险因素大体上可以分为遗传因素(如心脏病家族史、性别、年龄等)和环境因素(如吸烟、血脂异常、高血压、体育锻炼等)，近年来发现代谢因素如高同型半胱氨酸血症，感染因素如肺炎衣原体，幽门螺旋杆菌、巨细胞病毒等，以及多种参与免疫反应的细胞和分子也与CHD有着重要的关系。因此近年人们又提出CHD的发生发展机制与炎症和免疫反应有关。 动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是CHD的病理基础，炎症和免疫作为内在和外在的危险因素，是致AS发病的中介和中心环节，其中T淋巴细胞所引起的一系列特异性免疫反应在AS的发生发展中起重要作用。T淋巴细胞的活化依赖于T细胞受体与抗原提呈细胞(antigen-presentingcell，APC)表面MHC分子呈递的抗原之间的相互作用。DC是目前已知功能最强大的、唯一能激活初始型T细胞的APC，在免疫反应中起重要作用。当DC遇到外来病原体时，将抗原递呈给T细胞，使其活化增殖，分泌细胞因子，启动免疫反应。研究发现，动脉壁中有DC的存在，且在AS斑块中明显增加，尤其在炎症浸润区域与T淋巴细胞高度聚集。多种公认的致AS危险因素都可促使DC免疫功能成熟，提示DC在AS的发生发展中可能起着重要作用。其中，ox-LDL是引起AS免疫活化重要的自身抗原，可引起血管内皮功能失调、参与泡沫细胞形成、促进血管平滑肌细胞增殖及诱导凋亡等，促进人外周血单核细胞(peripheralbloodmononuclearcells，PBMC)源DC的分化成熟从而启动免疫反应。ox-LDL的致AS程度不仅决定于其自身水平，还取决于其受体及受体后效应的变化。经典ox-LDL受体是清道夫受体，其主要功能是摄取修饰后的LDL。近年来，一种新型的ox-LDL受体凝激素样氧化低密度度脂蛋白受体-1(lectin-likeoxidizedlowdensitylipoproteinreceptor-1，LOX-1)被认为是ox-LDL的特异性受体，它主要表达于血管内皮细胞，能特异结合、吞噬、降解ox-LDL，在成熟以及非成熟DC、单核细胞、巨噬细胞、B细胞也均有表达。所以LOX-1表达上调或激活参与了AS发生、发展的多个环节，但是对于ox-LDL诱导LOX-1在DC的表达的研究尚未见报道。 众所周知，男性和女性之间的心血管疾病的发病率有显著的差异，这除了与遗传和生活方式有关外，还有可能是女性内源性雌激素有抗AS作用，已经发现雌激素替代疗法可降低心血管疾病的危害性。雌激素对免疫系统的影响也颇受研究者的瞩目，研究表明，雌激素的替代疗法可治疗某些自身免疫性疾病，提示雌激素在免疫系统的维持和调节方面可能起着一定的作用。关于雌激素对DC影响的研究在其他疾病的研究中取得了令人满意的结果，但关于AS方面的研究未见报道。 鉴于上述证据，我们可以以CHD发生的炎症和免疫学机制为基础，研究经典危险因素中性别因素与免疫反应之间的关系，假设雌激素通过抑制AS发展的免疫反应对心血管系统发挥保护作用。因此，为进一步明确雌激素对心血管免疫保护作用的机制，本课题通过研究雌激素与AS发生发展的免疫机制，探讨雌激素对ox-LDL及其受体介导的DC成熟及功能的影响，阐明CHD新的发病机制，进而拓展CHD的诊疗手段。 本课题分为两个部分，第一部分：通过ELISA、直接化学发光免疫技术及流式细胞技术检测绝经后女性急性冠脉综合症(acutecoronarysyndrome，ACS)患者外周血hs-CRP、IFN-γ、IL-10、雌二醇(estradiol，E2)水平、DC前体各亚群分布情况，与胸痛综合症(chestpainsyndrome，CPS)及健康对照组进行比较，并且进行相关性分析来探讨CHD危险因素中性别因素与机体免疫反应的始动者DC之间的关系，研究性激素能否通过免疫反应这一环节对AS的发生、发展产生保护作用。第二部分：将人PBMC来源的DC作为实验模型，以ox-LDL作为抗原诱导DC成熟，用流式细胞技术、RT-PCR、Westernblotting和ELISA等方法，观察DC的成熟程度、DC刺激T淋巴细胞使T淋巴细胞增殖和分泌细胞因子的能力以及ox-LDL受体LOX-1mRNA和蛋白在DC的表达，并进一步应用17β-E2进行干预研究。本课题通过研究雌激素对心血管系统保护作用的免疫学机制，旨在为AS发生发展的免疫介导学说提供实验依据，为CHD的防治提供新的理论平台和技术手段，具有深远的意义。 通过上述两个部分的实验，本文得出以下结论： ①绝经后女性ACS患者外周血E2水平减低，E2与睾酮之间平衡紊乱； ②绝经后女性ACS患者DC亚群比例及绝对数量发生变化，体内DC处于活化状态； ③绝经后女性ACS患者E2水平与ACS患者外周血DC亚群相关； ④绝经后女性ACS患者外周血hs-CRP和细胞因子IFN-γ分泌增多，处于炎症激活状态； ⑤ox-LDL可促进DC分化成熟及免疫功能成熟； ⑥17β-E2部分下调DC免疫功能成熟； ⑦ox-LDL通过与其受体LOX-1结合促进DC免疫成熟，并促进Th1型免疫反应的发生； ⑧17β-E2下调ox-LDL所诱导的DC的免疫成熟及LOX-1的mRNA和蛋白的表达，表明17β-E2可能通过抑制ox-LDL与其受体结合发挥心血管保护作用。
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