摘要
二色胡枝子是一种多年生落叶灌木，适应性、抗逆性强，是优良的豆科植物饲料灌木，还有多种经济开发价值。4—香豆酸—辅酶A—连接酶（4CL）是木质素合成过程中的关键酶，反义转入4CL基因可降低一些植物的木质素含量。降低木质素含量，对于改善胡枝子饲料品质具有重要的现实意义。 本论文研究了二色胡枝子遗传转化中诸多影响因素，优化了遗传转化体系，并将反义4CL基因导入到二色胡枝子中。主要研究结果如下： 1、抗生素敏感性：在子叶节转化筛选阶段，卡那霉素或G418的适宜浓度分别为20和7．5mg/L；在抗性芽增殖培养时，卡那霉素或G418浓度分别为150mg/L和15mg/L在生根阶段，卡那霉素或G418浓度分别为20mg/L和5mg/L；而头孢霉素在各阶段适宜浓度为0～300mg/L；头孢霉素对农杆菌LBA4404和C58抑制浓度为200～300mg/L时效果理想。 2．遗传转化体系的建立与与优化：二色胡枝子子叶节转化试验中，对外植体进行预培养48h的处理，农杆菌C58浓度OD600=0．4～0．6范围内浸泡20～25分钟，共培养时间2d转化效率较高；延迟选择3d可以提高二色胡枝子子叶节的转化效率。 3．转基因植株分子生物学鉴定与形态观察：对转基因植株的进行了PCR、PCR—Southern和Southern检测，证实外源基因已插入二色胡枝子基因组中，并得到了两个抗性株系。转基因株系胸径变粗生长量增加，株型正常，叶色正常，但单叶的叶面积变大。生长速度明显慢于对照。Wiesner反应发现转基因与非转基因植株间苯三酚染色后有明显差异，由此表明转化植株木质素总含量有所下降。
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